Improved technology of mouse somatic cell nuclear transfer that greatly increases cloning efficiency

改良小鼠体细胞核移植技术，大幅提高克隆效率

• 批准号: 23580390
• 负责人: YAMADA Masayasu
• 金额: $ 3.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23580390/
• 关键词: 体細胞核移植; クローンマウス; ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤; 脱イオン化BSA; ビタミンC; エピジェネティックス; X染色体不活化異常; 脱イオン化BSA注入; trichostatin A; vitamin C; Oct3/4の発現; ヒストンアセチル化; ヒストンメチル化; マウス; 胚盤胞; Oct4発現; H3K27me3発現; 着床後発生; 着床前発生; エピジェネティックス調節

Production rate of cloned mice still is very low, which is thought to be attributed to abnormal epigenetic modifications and X-chromosomal inactivation (XCI) status in somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos. Here, we developed novel mouse SCNT technologies as follows; 1) treatment with valproi acid for 24 h from the 4-cell stage of SCNT embryos, which improved expression of Oct4 and trimethylated histone H3 lysine 27, a marker of the XCI status in SCNT blastocysts, 2) intracytoplasmic injection of deionized BSA after SCNT, which promoted expression of acetylated histone H3 lysine 9 and acetylated histone H4 lysine 12 at the pronuclear stage and production of cloned offspring, and 3) treatments with tricostatine A for 8 h from the beginning of activation of SCNT oocytes followed by vitamin C for 7 h, which promoted the oxidation of 5-methylcytocine to 5-hydroxymethylcytosine in pronuclear DNA of SCNT embryos and led to greatly increased production of cloned offspring.

克隆小鼠的产出率仍然很低，这被认为是由于体细胞核移植（SCNT）胚胎的异常表观遗传修饰和x染色体失活（XCI）状态所致。在此，我们开发了新的小鼠SCNT技术如下：1)从SCNT胚胎4细胞期开始用丙戊酸处理24小时，可提高Oct4和三甲基化组蛋白H3赖氨酸27 （SCNT囊胚XCI状态的标志）的表达；2)SCNT后胞浆内注射去离子BSA，可促进原核期乙酰化组蛋白H3赖氨酸9和乙酰化组蛋白H4赖氨酸12的表达和克隆后代的产生。3)在SCNT卵母细胞激活开始后，先用tricostatine A处理8 h，再用维生素C处理7 h，可促进SCNT胚胎原核DNA中5-甲基胞嘧啶氧化为5-羟甲基胞嘧啶，从而大大提高克隆后代的产量。

项目成果

マウス体細胞核移植胚の着床前発生に及ぼすビタミンCの効果

维生素C对小鼠体细胞核移植胚胎着床前发育的影响

• 发表时间: 2012
• 作者: 田島陽介;伊佐治優希;今井裕;山田雅保
• 通讯作者: 山田雅保

Derivation of murine-ES-cell like iPS cells in canine under the EOS reporter system

EOS报告系统下犬类iPS细胞的鼠类ES细胞的衍生

• 发表时间: 2012
• 作者: Kawaguchi T;Asano R;Tsukiyama T;Minami N;Yamada M;Hatoya S;Sugiura K;Inaba T;Imai H
• 通讯作者: Imai H

卵子学

卵学

• 作者: Koichi Shimizu;設楽浩志
• 通讯作者: 設楽浩志

脱イオン化ウシ血清アルブミンのマウス体細胞核移植胚への注入はその胚盤胞への発生およびヒストンアセチル化を促進する

将去离子牛血清白蛋白注射到小鼠体细胞核移植胚胎中可促进其发育为囊胚和组蛋白乙酰化。

• 发表时间: 2012
• 作者: 伊佐治優希;田島陽介;今井裕;山田雅保
• 通讯作者: 山田雅保

活性化後のバルプロ酸処理がマウス体細胞核移植胚の胚盤胞期への発生およびOct4の発現に及ぼす影響

激活后丙戊酸处理对小鼠体细胞核移植胚胎发育至囊胚期及Oct4表达的影响

• 作者: 伊佐治優希;村田萌子;高口尚也;今井裕;山田雅保
• 通讯作者: 山田雅保