权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

プラスミドDNA/キトサン/コンドロイチン硫酸三元複合体による遺伝子デリバリー

通过质粒 DNA/壳聚糖/硫酸软骨素三元复合物进行基因传递

基本信息

批准号：
12J03905
负责人：
萩原健司
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

pDNA/キトサン複合体をアニオン性高分子であるコンドロイチン硫酸(CS)で被覆し、物理化学的な安定性と遺伝子発現効率の向上を目指したpDNA/キトサン/CS三元複合体の開発に成功した。三元複合体のキャラクタリゼーション、in vitroおよびin vivoでの遺伝子導入を行ない、CSをpDNA/キトサン複合体の被覆剤として使用することの効果について以下に挙げる3点を見出した。(1)至適作製条件の決定と物理化学的安定性の評価分子量22kDa、硫酸化度6.9mol%のCSで被覆された三元複合体は、粒子径180nm程度、ゼータ電位-40mV、均一な球状のナノ粒子を形成し、この時の構成組成比を至適作製条件と決定した(pDNAのリン酸基:キトサンのアミノ基:CSのカルボキシル基または硫酸基の電荷比;1:5:16)。至適組成比で構成された三元複合体は高い血中安定性および酵素分解酵素耐性を示し、in vivoでの使用に適した特長を有していることが期待された。(2)複合体の細胞内動態の解明pDNA/キトサン複合体と比較し、三元複合体は種々の細胞株において遺伝子発現効率が向上した。その理由は細胞内への複合体の取り込み量が増加したことに起因していた。そこで、複合体の細胞内取り込み機構および細胞内輸送経路を解析した。その結果、三元複合体は主に、細胞が外部の物質を多量に取り込む飲作用(=マクロピノサイトーシス)で内部に取り込まれ、プロトンスポンジ効果でエンドソームから細胞質中に脱出し、複合体の状態を維持して核内に移行していることが明らかになった。(3)凍結乾燥製剤への応用三元複合体は凍結乾燥し使用直前に再水和する「凍結乾燥-再水和型」製剤としての利用が適していることが見出された。さらに、腫瘍形成マウスモデルの自殺遺伝子治療を行ったところ、凍結乾燥-再水和した三元複合体は用時調製した場合と同等に高い抗腫瘍効果を発揮した。三元複合体はin vitroだけでなくin vivoにおいても高い遺伝子発現効率を示す有用な遺伝子キャリアーであることが期待される。

PDNA / キトサン complex をアニオン high molecular であるコンドロイチン sulfate (CS) で coating し, physical chemistry, な stability と of 伝 son 発の is sharper rate upward を refers した pDNA / キトサン / CS ternary complex の発に successful した. Ternary complex のキャラクタリゼーション, the in vitro および in vivo での posthumous son 伝 import line をない, CS を pDNA / キトサン complex の coating tonic として use することの unseen fruit について following に挙げる 3 points out をした. の system conditions (1) to the optimal decision と physicochemical stability の review 価 molecular weight kda, sulfated degree 6.9 mol % 22 の CS で coating された ternary complex は, the degree of particle diameter of 180 nm, ゼータ potential - 40 mv, uniform な globular のナをノ particles formed し, このの form than とを to optimum cropping conditions determine した (p DNA リ <s:1> acid group :キトサ <e:1> アノ group :CS カボキシボキシ group またリ sulfate group <s:1> charge ratio; 1:5:16. To optimum than で constitutes された ternary complex high はい blood when qualitative および patience をし, enzyme decomposition enzyme in vivo で used のにした strength を have していることが expect された. (2) complex dynamic のの cells interpret pDNA / キトサン complex と compare し, ternary complex は々の cell lines において posthumous son 伝発 now working rate が upward した. Youdaoplaceholder0 そ reason て intracellular へ <e:1> complex <e:1> taking the 込み amount が increase <s:1> たとにとにとに cause とにててた Youdaoplaceholder0 でで, complex <s:1> intracellular 込み mechanism および intracellular transport pathway を analysis たた. その results, ternary complex はに Lord, cell が external の material をに abundant り込む drink effect (= マクロピノサイトーシス) で internal に take り込まれ, プロトンスポンジ unseen fruit でエンドソームからに emerge し in the cytoplasm, complex のを maintain して in nuclei に transitional していることが Ming らかになった. Freeze drying system (3) tonic への応 with ternary complex は freeze drying し ahead に water again and する "freeze drying - water and" tonic としての by using がしていることが shows された. さらに, swollen sores formation マウスモデルの suicide heritage 伝 son treatment line をったところ and freeze drying - water again and した ternary complex は when modulation しと equally high にいた occasions against swollen sores unseen fruit を発 swing した. Ternary complex は in vitro だけでなく in vivo においても high い heritage 伝 son を発 now working rate in す useful な heritage 伝 son キャリアーであることが expect される.