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新規「レインボーレポーターシステム」その遺伝子資源・動物資源の開発

新型“彩虹记者系统”的开发及其遗传和动物资源

基本信息

批准号：
12J08563
负责人：
富松航佑 (2013-2014)
金额：
$ 2.53万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は複数のインテグレースシステムを用いて、性質の変化した細胞の系譜を多色の発光遺伝子と蛍光遺伝子のパターンを変化させることで詳細に追跡する新規レポーターシステムを構築する事を目的として研究を行った。システムは、ルシフェラーゼ遺伝子をインテグレースのターゲットサイトで挟み、インテグレースの発現によってルシフェラーゼ遺伝子が除去され、蛍光遺伝子が発現するデザインとした。このシステムはそれぞれTP901-1, R4, Bxb1のインテグレース毎にGFP, OFP, RFPが発現する３種類のベクターを作成し、それぞれのシステムからの転写干渉を防ぐためインスレーターを挟みタンデムに繋げた。このベクターとインテグレースをCHO細胞にコトランスフェクションを行った結果、インテグレース発現に応じた蛍光タンパク質の発現が確認された。構築されたベクターは30kbを超え、安定発現する細胞株を取得する事が困難であった事と、コピー数とポジションエフェクトを回避しながら細胞内に維持するためにマウス人工染色体ベクターへと搭載を行った。マウス人工染色体を保持するCHO細胞にレポーターシステムとCre recombinaseを発現させるためのベクターをコトランスフェクションし、人工染色体上にあるloxPサイトに組み込み、さらに人工染色体上でプラスミド同様にレポーターが作動することを確認した。この結果は人工染色体上に搭載した任意の遺伝子の発現を特異的なインテグレースの誘導により変換可能な事を示唆した。人工染色体に搭載した本システムはマウスのin vivoイメージングに用いる為CHO細胞からマウスES細胞へ微小核融合法により導入を試みているが、適切なクローンが取得されていない為、条件の最適化を行っている。

This study focuses on the application of multiple species, the transformation of their properties, the transformation of their polychromatic species, and the construction of new species. In the case of a child, the child is removed from the child and the child is released from the child. These categories include TP901-1, R4, Bxb1, GFP, OFP, RFP, and RFP. The results of this study were confirmed by the results of the study on CHO cells. The construction of 30kb artificial chromosome is difficult to obtain, and the number of artificial chromosomes is difficult to maintain. The artificial chromosome is maintained in CHO cells, and the expression of Cre recombinase in CHO cells is confirmed. The loxP recombinase on the artificial chromosome is also confirmed. The results showed that the expression of arbitrary genes on artificial chromosomes was unique and that the induction of these genes was possible. Artificial chromosomes are loaded into CHO cells and are obtained by micro-nuclear fusion. The optimal conditions are determined.