Development of a technique for selective chemical labeling and modification of intracellular proteins

开发细胞内蛋白质选择性化学标记和修饰技术

• 批准号: 23685038
• 负责人: TSUKIJI Shinya
• 金额: $ 9.82万
• 依托单位: Nagaoka University of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011-11-18 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23685038/
• 关键词: 蛋白質ラベリング; アフィニティラベリング; 蛍光イメージング; 部位特異的変異法; 化学修飾; アフィニティラベル化; 蛋白質; リガンド; トシル化学; 細胞; FKBP12; 光クロスリンク; 蛋白質-蛋白質相互作用

Ligand-directed tosyl (LDT) chemistry is a technique that allows selective chemical labeling of specific (native) proteins in cells and in vivo. However, the LDT chemistry is still at the beginning stage, and thus its full potential has yet to be exploited. In this work, we first attempted to apply the LDT chemistry as a novel tool for live-cell fluorescence imaging of endogenous proteins. Using a newly-designed LDT reagent, we were able to selectively label endogenous FKBP12 with an organic fluorescent dye, Oregon Green (OG), in living mammalian cells. It was also possible to visualize the rapamycin-mediated complexation of the OG-labeled FKBP12 and DsRed-fused FRB inside of the cells by FRET imaging. Furthermore, in this work, we demonstrated that the chemical labeling rate and efficiency could be significantly improved by combining the LDT chemistry with the site-directed mutagenesis technique.

配体导向的甲苯磺酰 (LDT) 化学是一种允许对细胞和体内的特定（天然）蛋白质进行选择性化学标记的技术。然而，LDT化学仍处于起步阶段，因此其潜力尚未得到充分开发。在这项工作中，我们首先尝试应用 LDT 化学作为内源蛋白活细胞荧光成像的新工具。使用新设计的 LDT 试剂，我们能够在活哺乳动物细胞中用有机荧光染料俄勒冈绿 (OG) 选择性标记内源性 FKBP12。通过 FRET 成像，还可以观察细胞内 OG 标记的 FKBP12 和 DsRed 融合的 FRB 之间雷帕霉素介导的络合。此外，在这项工作中，我们证明，通过将 LDT 化学与定点诱变技术相结合，可以显着提高化学标记率和效率。

项目成果

リガンド分子細工による新しいケミカルバイオロジー方法論の開拓

通过配体分子工程开发新的化学生物学方法

• 发表时间: 2013
• 作者: 松尾 勇志;新谷 恵;松林 伸幸;築地真也
• 通讯作者: 築地真也

Fluorophore Labeling of Native FKBP12 by Ligand-Directed Tosyl Chemistry Allows Detection of Its Molecular Interactions in Vitro and in Living Cells

• DOI: 10.1021/ja401956b
• 发表时间: 2013-05-08
• 期刊: JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
• 影响因子: 15
• 作者: Tamura, Tomonori;Kioi, Yoshiyuki;Hamachi, Itaru
• 通讯作者: Hamachi, Itaru

日本化学会第93春季年会

第93届日本化学会春季年会

• 发表时间: 2013
• 作者: 松元深;大野敏信;他;會澤純雄，菊池亮太，菅 大輔，高橋 諭，平原英俊，成田榮一
• 通讯作者: 會澤純雄，菊池亮太，菅 大輔，高橋 諭，平原英俊，成田榮一

LDT化学による細胞内蛋白質間相互作用の光クロスリンク検出

使用 LDT 化学进行细胞内蛋白质-蛋白质相互作用的光学交联检测

• 发表时间: 2012
• 作者: 田村朋則;築地真也;浜地格
• 通讯作者: 浜地格

LDT化学を用いて光反応基を導入したFKBP12による細胞内蛋白質相互作用検出

使用 FKBP12 和使用 LDT 化学引入的光反应基团进行细胞内蛋白质相互作用检测

• 发表时间: 2011
• 作者: 田村朋則;築地真也;浜地格
• 通讯作者: 浜地格