アフィニティラベリングによるオピオイド受容体の結合部位の決定

通过亲和标记确定阿片受体的结合位点

• 批准号: 06680587
• 负责人: 下東 康幸
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680587/
• 关键词: オピオイド受容体; アフィニティラベリング; エンケファリン; ペプチド合成

3‐ニトロ‐2‐ピリジンスルフェニル(Npys)で活性化したチオール基を持つエンケファリンは、オピオイド受容体の遊離チオール基(システイン残基)をシスルフィド結合を介してアフィニティラベルできる。本研究の目的は、機能的に重要な役割を担うこのようなオピオイド受容体システイン残基を同定することである。まず、ラット肝臓より酵素t‐RNA‐チロシンシンターゼを精製し、Npys含有前駆体ペプチドH‐D‐Ala‐Gly‐Phe‐Leu‐Cys(Npys)へのTyrの導入を検討した。しかし、Npys‐エンケファリンの生成は認められたものの、量的な単離まで至らなかった。この理由には酵素標品の純度及び前駆体ペプチドのN端にD‐アミノ酸をもつことなどが考えられた。そこで、微量でもアフィニティラベリングが可能な条件を検討したところ、[^3H]‐[D‐Ala^2,Leu^5]enkephaly‐Cys(Npys)^6はδ型を、[^3H]‐[D‐Ala^2,Leu(CH_2S‐Npys)^5]enkephalinはμ型をそれぞれ100〜150倍も高選択的にラベルできることが判明した。このため、現在^3H‐チロシンを用いて放射ラベルNpys‐エンケファリンの合成を試みている。一方、モルヒネのアンタゴニスト、ナルトレキサミンのアフィニティカラムを作製した。これにラット脳可溶化物を通し、電気泳動で調べたところ、分子量相当の受容体画分が認められ、このカラムの有効性が確認された。現在Npys‐エンケファリンを反応させた脳膜標品のアフィニティ精製を検討している。コンピュータモデリングによるシステイン残基のシミュレーションを実施したところ、受容体の細胞膜外ドメインの第一、第二ループに存在する2個のシステイン残基の可能性が示唆された。このため、立体化学的に堅固なモルヒネの異なる部位にNpys基を導入した誘導体で調べたところ、ラベルされるシステインが2個ある可能性のあることが指摘された。この新規な知見をペプチドのエンケファリンでも確認すべく、Npys誘導体をデザインした。

3-N-2-N-3-N-4-N-4 - 4-N-4 - 4-N-4-N-4-N-4- The purpose of this study is to identify the functional and important residues of the receptor. The introduction of Tyr into Npys containing precursor H-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Cys(Npys) was discussed. We're going to have to go through the motions. The reason for this is that the purity of the enzyme standard and the N-terminal of the precursor are not tested. For example,[^3H] ‐[D‐Ala^2,Leu^5]enkephaly‐Cys(Npys)^6 is delta type,[^3H] ‐ [D ‐ Ala^2,Leu(CH_2S‐Npys)^5]enkephalin is μ type, and the number of possible conditions is 100 to 150. In this paper, the author tries to analyze the synthesis process of Npys-1 and Npys-2 in the process of synthesis. A party, a party The solubility of these compounds is confirmed by the conductivity, electromobility, and molecular weight equivalent of the receptor. Now Npys- The possibility of the existence of two different residues in the extracellular membrane of the receptor was demonstrated. There are two possibilities for the introduction of Npys into the stereochemical structure of the molecule. This new regulation is known as the NPYS inducer.

项目成果

Teruo Yasunaga: "Selective affinity labelling ofrat brain μ and δ opioid receptors by thiol-containing enkephalins" Peptide Chemisutry 1993. 333-336 (1994)

Teruo Yasunaga：“含硫醇的脑啡肽对大鼠脑 μ 和 δ 阿片受体的选择性亲和标记” Peptide Chemisutry 1993. 333-336 (1994)

Teruo Yasunaga: "Specificity and Selectivity in affinity labeling of opiopide Receptors by cysteamine-containing enkephalin analogs" Peptide Chemistry 1995. (印刷中). (1995)

Teruo Yasunaga：“含半胱胺脑啡肽类似物的阿片受体亲和标记的特异性和选择性”肽化学 1995 年。（出版中）。

Teruo Yasunaga: "Specific affinity labelling of μ opioid receptors by S-activated enkephalin analog containing P-nitrophenylanine" Bull.Chem.Soc.Jpn.67. 296-299 (1994)

Teruo Yasunaga：“含有 P-硝基苯丙氨酸的 S-激活脑啡肽类似物对 μ 阿片受体的特异性亲和力标记”Bull.Chem.Soc.Jpn.67 (1994)。

児玉 浩明: "シクロプロパンアミノ酸の合成と立体制約因子としての生理活性ペプチドへの導入" 有機合成化学教会誌. 52. 180-191 (1994)

Hiroaki Kodama：“环丙烷氨基酸的合成及其作为空间约束引入生物活性肽”《合成有机化学杂志》52. 180-191 (1994)。