Identification of genotype of hepatitis C virus using high-sensitivity in situ hybridization

高灵敏原位杂交鉴定丙型肝炎病毒基因型

• 批准号: 24790367
• 负责人: SHIOGAMA Kazuya
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24790367/
• 关键词: in situハイブリダイゼーション法; C型肝炎ウイルス; locked nucleic acid; ビオチンフリーチラミド増感法; ヒト肝臓型HCV感染キメラマウス; HCV; in situ hybridization; AT tailing; HCV genotyping; nested RT-PCR

We were successful to detect HCV-RNA in formalin-fixed, paraffin-embedded sections of liver by using high-sensitivity in situ hybridization (ISH) combined with LNA-modified oligonucleotide probe and biotin-free tyramide amplification system (CSAII). HCV-RNA was demonstrated in HCV-infected liver tissues from both chimeric mice and 9 (82%) of 11 patients with HCV infection. HCV-RNA was not identified chronic hepatitis B, fatty liver, autoimmune hepatitis, and hepatocellular carcinoma. Nested RT-PCR confirmed the genotype in 8 (73%) of 11 liver (type 1b: 6 lesions and type 2a: 2 lesions). HCV genotyping could be detected by nested RT-PCR, while high-sensitivity ISH technique occurred cross reaction among the HCV genotypes.

通过使用高灵敏度原位杂交（ISH）结合LNA修饰的寡核苷酸探针和无生物素酪酰胺扩增系统（CSAII），我们成功地在福尔马林固定、石蜡包埋的肝脏切片中检测到HCV-RNA。 HCV-RNA 在两只嵌合小鼠和 11 名 HCV 感染患者中的 9 名 (82%) 的 HCV 感染肝组织中得到证实。 HCV-RNA未鉴定出慢性乙型肝炎、脂肪肝、自身免疫性肝炎和肝细胞癌。巢式 RT-PCR 证实了 11 个肝脏中的 8 个（73%）的基因型（1b 型：6 个病变，2a 型：2 个病变）。巢式RT-PCR可以检测HCV基因分型，而高灵敏ISH技术则可以检测HCV基因型之间的交叉反应。

项目成果

Demonstration of hepatitis C virus RNA with in situ hybridization employing a locked nucleic Acid probe in humanized liver of infected chimeric mice and in needle-biopsied human liver.

• DOI: 10.1155/2013/249535
• 发表时间: 2013
• 期刊: International journal of hepatology
• 影响因子: 1.8
• 作者: Shiogama K;Inada K;Kohara M;Teramoto H;Mizutani Y;Onouchi T;Tsutsumi Y
• 通讯作者: Tsutsumi Y

環境にやさしいグロコット染色の確立 : 無水クロム酸に依存しない改良法の技術開発

环保Grocot染色的建立：不依赖铬酐的改进方法的技术开发

• 发表时间: 2013
• 作者: 塩竈和也;水谷泰嘉;尾之内高慶;稲田健一;堤寛
• 通讯作者: 堤寛

In situ hybridization AT-tailing法による重症熱性血小板減少症候群ウイルスの証明

原位杂交AT加尾法验证发热血小板减少综合征病毒

• 发表时间: 2014
• 作者: 塩竈和也;水谷泰嘉;尾之内高慶;小川博久;馬原文彦;稲田健一;堤寛
• 通讯作者: 堤寛

環境にやさしい染色法の確立 : グロコット染色およびアザン染色の改良

建立环保染色方法：格罗科特染色和阿赞染色的改进

• 发表时间: 2013
• 作者: 塩竈和也;水谷泰嘉;尾之内高慶;稲田健一;堤寛
• 通讯作者: 堤寛

HCV感染モデルマウスを用いた高感度in situ hybridization法によるHCVの検出

HCV感染模型小鼠高灵敏原位杂交法检测HCV

• 发表时间: 2012
• 作者: 稲田健一;塩竈和也;小原道法;水谷泰嘉;堤寛
• 通讯作者: 堤寛