部位特異的組換えにおけるドナー選択制御機構の解析

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相同組換えは、生物種多様性に寄与する一方で、DNA損傷に対する修復に働きゲノム安定性維持に深く関わる。分裂酵母のホモタリックな野生型株（h90）において、相同組換え機構は接合型変換にも働く。分裂酵母の接合型には、Plus（P）とMinus（M）があり、mat1遺伝子座に入る遺伝情報によって決定されている。接合型変換は、mat1遺伝子座とサイレントなドナー遺伝子座（mat2Pもしくはmat3M）との間で起こり、前者がレシピエント、後者の片方がドナーとなる一方向性の遺伝子変換である。この際、上記２つの遺伝子座がドナー候補となるが、その選択は細胞の接合型（つまり、mat1座に入っている遺伝情報）により厳密に制御されており、この制御によって、P→M、M→Pへの効率的な変換が保障されている。これまでに、Class Ibグループに分類されるSwi2、Swi5、Swi6の少なくとも3種がドナー選択制御に働くことが示唆されているが、ドナー制御機構の全体像は未だ不明な点が多く残されている。これまでの知見から、未だ同定されていないClass Ib因子が存在することが予想されたため、本研究では、分裂酵母破壊株ライブラリーを用いてClass Ib因子のスクリーニング、及び、得られた候補因子の機能解析を計画した。破壊株ライブラリーがh+株（h90派生型で、接合型変換は起こらないが、カセット間の組換えは起こる）バックグラウンドで作製されたものであるため、当初の計画では、これを利用してスクリーニングを行なう予定であった。しかしながら、前年度の計画実施の初期段階でh90株でスクリーニングを行なった方が厳密性が高いことが判明したため、掛け合わせによって全ての破壊株のh90株を作製し、スクリーニングすることとした。今年度は、約1000株の構築とスクリーニングを実施し、約20種類の候補因子を同定した。