部位特異的組換えにおけるドナー選択制御機構の解析

位点特异性重组中供体选择控制机制分析

• 批准号: 25440005
• 负责人: 筒井 康博
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-25440005/
• 关键词: 相同組換え; 分裂酵母; 接合型変換; DNA組換え

相同組換えは、生物種多様性に寄与する一方で、DNA損傷に対する修復に働きゲノム安定性維持に深く関わる。分裂酵母のホモタリックな野生型株（h90）において、相同組換え機構は接合型変換にも働く。分裂酵母の接合型には、Plus（P）とMinus（M）があり、mat1遺伝子座に入る遺伝情報によって決定されている。接合型変換は、mat1遺伝子座とサイレントなドナー遺伝子座（mat2Pもしくはmat3M）との間で起こり、前者がレシピエント、後者の片方がドナーとなる一方向性の遺伝子変換である。この際、上記２つの遺伝子座がドナー候補となるが、その選択は細胞の接合型（つまり、mat1座に入っている遺伝情報）により厳密に制御されており、この制御によって、P→M、M→Pへの効率的な変換が保障されている。これまでに、Class Ibグループに分類されるSwi2、Swi5、Swi6の少なくとも3種がドナー選択制御に働くことが示唆されているが、ドナー制御機構の全体像は未だ不明な点が多く残されている。これまでの知見から、未だ同定されていないClass Ib因子が存在することが予想されたため、本研究では、分裂酵母破壊株ライブラリーを用いてClass Ib因子のスクリーニング、及び、得られた候補因子の機能解析を計画した。破壊株ライブラリーがh+株（h90派生型で、接合型変換は起こらないが、カセット間の組換えは起こる）バックグラウンドで作製されたものであるため、当初の計画では、これを利用してスクリーニングを行なう予定であった。しかしながら、前年度の計画実施の初期段階でh90株でスクリーニングを行なった方が厳密性が高いことが判明したため、掛け合わせによって全ての破壊株のh90株を作製し、スクリーニングすることとした。今年度は、約1000株の構築とスクリーニングを実施し、約20種類の候補因子を同定した。

In the same group え は, biological kind of many others in に send and す る で, DNA damage に す seaborne る repair に 働 き ゲ ノ ム stability maintaining に deep く masato わ る. The wild strain (h90) of schizomycetes ホモタリッ ホモタリッ な な is にお て て, and the conjugated strain with the same assembly え structure is に に く く く. Split yeast の mating type に は, Plus (P) と Minus (M) が あ り, mat1 heritage 伝 stroma に into る heritage 伝 intelligence に よ っ て decided さ れ て い る. Traces of mating type variations in は, mat1 伝 stroma と サ イ レ ン ト な ド ナ ー heritage 伝 stroma (mat2P も し く は mat3M) と の で up between こ り, the former が レ シ ピ エ ン ト, the latter の party が ド ナ ー と な る traces of a directional の 伝 son - in で あ る. こ の interstate, written 2 つ の heritage 伝 stroma が ド ナ ー alternate と な る が, そ の sentaku は cells の mating type (つ ま り, mat1 に into っ て い る heritage 伝 intelligence) に よ り 厳 dense に suppression さ れ て お り, こ の suppression に よ っ て, P - M, M - P へ の な the working rate variations in が security さ れ て い る. こ れ ま で に, Class Ib グ ル ー プ に classification さ れ る Swi2, Swi5 and Swi6 の less な く と も three が ド ナ ー sentaku suppression に 働 く こ と が in stopping さ れ て い る が, ド ナ ー royal institution の all like は no だ unknown な point が く more residual さ れ て い る. こ れ ま で の knowledge か ら, not だ with さ れ て い な い Class Ib factors が す る こ と が to think さ れ た た め, this study で は, split broken 壊 yeast strains ラ イ ブ ラ リ ー を with い て Class Ib factor の ス ク リ ー ニ ン グ, and び ら れ た alternate factor analytical を の function plan し た. Broken 壊 strains ラ イ ブ ラ リ ー が h + strains (h90 derived type で, joint type variations in は こ ら な い が, カ セ ッ ト の between groups in え は up こ る) バ ッ ク グ ラ ウ ン ド で cropping さ れ た も の で あ る た め, plan at the beginning の で は, こ れ を using し て ス ク リ ー ニ ン グ を line な う designated で あ っ た. し か し な が ら early, before the annual の plan be の Duan Jie で h90 strains で ス ク リ ー ニ ン グ を line な っ た party が 厳 high tightness が い こ と が.at し た た め, hang け わ せ に よ っ て full て の broken 壊 strains の h90 plant し the を cropping, ス ク リ ー ニ ン グ す る こ と と し た. This year, approximately 1,000 plants were constructed with とス, リ, <s:1>, ニ, グを, グを, and <s:1>. About 20 species of <s:1> candidate factors were simultaneously determined with を and た.

项目成果

Multiple regulation of Rad51-mediated homologous recombination by fission yeast F-box DNA helicase Fbh1

裂殖酵母 F-box DNA 解旋酶 Fbh1 对 Rad51 介导的同源重组的多重调控

• 发表时间: 2013
• 作者: Yasuhiro Tsutsui;Yumiko Kurokawa;Yumiko Kawano;Fumiaki Yamao;Hiroshi Iwasaki
• 通讯作者: Hiroshi Iwasaki

Swi5-Sfr1 protein stimulates Rad51-mediated DNA strand exchange reaction through organization of DNA bases in the presynaptic filament.

• DOI: 10.1093/nar/gkt1257
• 发表时间: 2014-02
• 期刊: Nucleic acids research
• 影响因子: 14.9
• 作者: Fornander LH;Renodon-Cornière A;Kuwabara N;Ito K;Tsutsui Y;Shimizu T;Iwasaki H;Nordén B;Takahashi M
• 通讯作者: Takahashi M

分裂酵母Fボックスヘリカーゼによる相同組換えの多面的制御機構

裂殖酵母F-box解旋酶同源重组的多效性控制机制

• 发表时间: 2014
• 作者: K. Tanaka;K. Tatebayashi;A. Nishimura;K. Yamamoto;H.Y. Yang;and H. Saito;分裂酵母Fボックスヘリカーゼによる相同組換えの多面的制御機構
• 通讯作者: 分裂酵母Fボックスヘリカーゼによる相同組換えの多面的制御機構

Dual roles of fission yeast F-box DNA helicase Fbh1 during homologous recombination

裂殖酵母 F-box DNA 解旋酶 Fbh1 在同源重组过程中的双重作用

• 发表时间: 2013
• 作者: Yasuhiro Tsutsui;Yumiko Kurokawa;Yumiko Kawano;Fumiaki Yamao;Hiroshi Iwasaki
• 通讯作者: Hiroshi Iwasaki

分裂酵母Fbh1ヘリカーゼによる相同組換えの多様な制御機構

裂殖酵母Fbh1解旋酶同源重组的多种控制机制

• 发表时间: 2013
• 作者: 筒井康博;黒川裕美子;川野由美子;山尾文明 ;岩崎博史
• 通讯作者: 岩崎博史