Faltung und Assemblierung von Spinnenseidenproteinen

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In dem beantragten Projekt sollen die Grundlagen der Assemblierung von Spinnenseidenfibrillen und -fäden der "dragline" Spinnenseidenproteine ADF3 und ADF4 der Gartenkreuzspinne Araneus diadematus untersucht werden. In Vorarbeiten wurde von uns die rekombinante Expression von adf3 und adf4 im Baculovirus-Sf9Expressionssystem etabliert, so dass Untersuchungen mit rekombinant hergestellten, authentischen Spinnenseidenproteinen durchgeführt werden können. Um die Struktur-/Funktionsbeziehung dieser beiden Spinnenseidenproteine im Detail zu analysieren, sollten auch unterschiedliche, aus der Primärsequenz der Spinnenseidenproteine ausgewählte "Spinnensiedengenmodule", die für unterschiedliche repetitive Sequenzen in den Spinnenseiden kodieren, exprimiert werden. Die synthetisch hergestellten Spinnenseidengenmodule sind für die bakterielle Expression optimiert und könne beliebig miteinander kombiniert werden, was zu unterschiedlichen synthetischen Spinnenseidengenen führt. Die in Sf-9 Zellen und die in Bakterien produzierten Proteine sollen auf Struktur, Stabilität, Löslichkeit und Aggregations-/Assemblierungsverhalten untersucht werden, um Einblicke in die den Spinnenseidenfäden zugrunde liegende einzigartige Stabilität zu gewinnen.