Strukturaufklärung und Assemblierung von African-cassava-mosaic-Virionen

非洲木薯花叶病毒体的结构解析和组装

• 批准号: 20865228
• 负责人: Professor Dr. Holger Jeske (†)
• 金额: --
• 依托单位: Forschungseinheit Molekulare und Synthetische Pflanzenvirologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/20865228?language=en
• 关键词: Strukturaufkl; rung; und; Assemblierung; von

Durch Elektronen-Cryomikroskopie (ECM) wurde die bisher höchste Auflösung der ACMV-Kapside für Begomoviren (Familie Geminiviridae) erreicht. Die Bindeeigenschaften von Abutilon mosaic virus (AbMV) Hüllprotein mit DNA sind mit dem electrophoretic mobility shift assay (EMSA) in vitro charakterisiert worden. Aus Pflanzen isolierte Geminiviren sind allerdings nicht homogen, weil zum einen heterogene virale DNA verpackt wird, zum zweiten die Virusproteine proteolytisch angegriffen werden und zum dritten das Nuclear shuttle protein (NSP), das gleiche Eigenschaften wie das Hüllprotein besitzt, co-assemblieren könnte. Daraus entstehende Mikrohetereogenitäten beeinträchtigen die Auflösung in der ECM. Aus diesen Gründen sollen Hüllproteine des ACMV ectopisch in Hefen exprimiert und maßgeschneiderte virale DNA in Bakterien/Phagen oder Hefen repliziert werden. Nach Assemblierung in vitro oder in vivo sollen Geminipartikel mittels klassischer Elektronenmikroskopie, ECM, elektronenmikroskopischer Tomographie und Atomic force microscopy (AFM) analysiert werden. Dabei sollen Hüllproteine von ACMV-Stämmen verglichen werden, die von der Weißen Fliege (Bemisia tabaci) übertragen (ACMV-Nigeria) oder nicht übertragen werden (ACMV-Kenia).

电子低温冷冻技术（ECM）是ACMV-Kapside对双生病毒科（Familie Geminiviridae）的最佳辅助手段。利用电泳迁移率变动分析（EMSA）对AbMV的Hüll蛋白进行了体外沃登。双生子病毒是一种非同源病毒，在一个异源病毒DNA包装中，通过韦尔登的蛋白水解作用，产生核穿梭蛋白（NSP），这种蛋白与Hüllprotein一样具有共同的特征。Daraus entstehende Mikrohetereogenitäten beinträchtigen die Aflösung in der ECM. ACMV在Hefen中的异位表达和病毒DNA在Bakterien/Phagen或Hefen韦尔登中的大规模复制可导致Hüllproteine死亡。体外组装或体内组装的Geminipartikel包括经典的电子显微镜、ECM、电子显微镜断层扫描和原子力显微镜（AFM）分析韦尔登。ACMV-Stämmen的Hüllproteine可以通过以下途径获得：烟草烟粉虱（Bemisia tabaci）的Hüllproteine（ACMV-Nigeria）或非韦尔登（ACMV-Kenia）。