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下垂体幹・前駆細胞の起源とその運命の遺伝的追跡

垂体干细胞和祖细胞的起源和命运的基因追踪

基本信息

批准号：
15J11568
负责人：
上春浩貴
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Meiji University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J11568/
关键词：
下垂体神経堤細胞発生幹細胞 Cre

项目摘要

本研究は、下垂体幹細胞が外部より侵入している可能性に着目し、遺伝子改変動物を作製・解析する事で下垂体幹細胞が外部より侵入している事を明らかにする事を目的とした。これまでの我々の解析結果より、下垂体幹・前駆細胞で発現しているPrrx1, Prrx2, Prop1, S100b遺伝子に着目した。それぞれの遺伝子のプロモーター下に、Creリコンビナーゼと改変エストロジェン受容体の融合タンパク質であるCreERT2を結合させ、遺伝子発現状況下でCreERT2を発現する遺伝子改変ラットの作出を試み、Prrx1-CreERT2、S100b-CreERT2ラットを作出した。レポーター遺伝子であるCAG-CAT-Venus配列を遺伝子導入したラットと交配し、Prrx1- or S100b-CreERT2/CAG-CAT-Venusラットを作出した。作出された遺伝子改変ラットでは、CreERT2遺伝子の発現が確認された。しかし、Creに対する特異的な抗体を用いた免疫組織学的解析によるCreERT2の検出を試みたが、陽性シグナルは得られなかった。タモキシフェン投与後にVenusの発現も得られなかった事から、遺伝子改変動物の作出に失敗したと判断した。同時に、様々な侵入へする事が知られている神経堤細胞に着目し、神経堤細胞と神経堤由来細胞を特異的に標識するP0-Cre/CAG-CAT-EGFPマウスを用いた解析を行なった。その結果、神経堤細胞は下垂体発生初期に下垂体に侵入し、すぐに下垂体幹細胞へと分化転換している事が明らかとなった。また、成体下垂体では全ての下垂体ホルモン産生細胞の一部へと分化している事に加え、一部の神経堤細胞は未分化性を有したまま局在している事を明らかにした。この事から、胎仔期に外部より侵入した神経堤細胞が下垂体幹細胞としてホルモン産生細胞を供給している事が明らかとなった。

This study aims to clarify the possibility of external invasion of pituitary stem cells and to clarify the role of pituitary stem cells in animal behavior. Prrx1, Prrx2, Prop1, S100b genes were found in pituitary stem cells. CreERT 2 is combined with CreERT2, and CreERT 2 is generated under the condition of gene generation. Prrx1-CreERT2 and S100b-CreERT 2 are generated. CAG-CAT-Venus alignment is introduced into the genome, Prrx1- or S100b-Creert2/CAG-CAT-Venus alignment is made. Make sure you change your profile and confirm the CreERT2 profile. Cre, Cre. The discovery of Venus in the first place and the failure of the animal in the second place At the same time, the P0-Cre/CAG-CAT-EGFP system can be used to analyze the invasion of human brain cells. As a result, the pituitary stem cells invade the pituitary at the early stage of pituitary development, and the pituitary stem cells differentiate into different cells. In adult pituitary gland, some cells are differentiated and some cells are undifferentiated. This is the first time that we've seen this.