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細胞特異的in vivo遺伝子導入システムによる神経堤細胞の発生・分化機構の解析

使用细胞特异性体内基因转移系统分析神经嵴细胞发育和分化机制

基本信息

批准号：
14034245
负责人：
福原茂朋
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14034245/
关键词：
神経堤細胞エンドセリンレトロウイルス TVA 遺伝子導入鰓弓

项目摘要

神経堤細胞は、各種末梢神経細胞、グリア細胞、内分泌細胞、色素細胞など様々な細胞への分化能を有する幹細胞である。本研究では神経堤細胞の各細胞系への発生・分化メカニズムの解明を最終目的とし、(1)神経堤細胞特異的in vivo遺伝子導入システムの開発と、(2)頭部神経堤細胞による鰓弓形成メカニズムの解析を行なった。(1)を開発するために、トリレトロウイルス受容体TVAの系を用いた。哺乳動物細胞はTVAを持たないが、この遺伝子を外来的に発現させることによりRcasウイルスによる感染を受けるようになる。そこで、神経堤細胞にTVAを特異的に発現させることにより、これらの細胞への特異的な遺伝子導入を試みた。エンドセリンA受容体(ETAR)は、頭部神経堤細胞に発現し、鰓弓上皮から産生されるエンドセリン-1(ET-1)シグナルを伝達することにより鰓弓形成に深く関与している。そこで、TVAを神経堤細胞に発現させる為、ETARプロモーターによってTVAの発現が制御されるトランスジェニックマウス(Tgマウス)を作製した。このマウス由来の神経堤細胞および胚をRcasGFPウイルスで感染させたところ神経堤細胞に効率的に遺伝子が導入され、その有効性が示された。さらに、cre-recombinase (cre)依存的にTVAを発現するマウスを開発するため、CAG-loxp-CAT-pA-loxp-TVA-ires-βgeo-pA (CAG ; chicken β-actin promoter, CAT ; chloramphenicolacetyltransferase pA ; polyadenylation signal, β geo ; LacZ-neomycin fusion protein) DNA断片を持つTgマウスを作製した。このマウスを血管内皮細胞特異的にcreが発現するTie2-creマウスと交配したところ、血管内皮細胞におけるTVAの発現およびそれを介したRcasウイルスの感染が認められた。今後、神経堤細胞にcreを発現するTgマウス(PO-creマウスなど)との交配を行い、神経堤細胞特異的な遺伝子導入を可能にする。(2)ではエンドセリンシグナルを中心に頭部神経堤細胞による鰓弓形成メカニズムの解析を行った。その結果、鰓弓の形成には胎生8.75-9.5のET-1/ETARシグナルが必要であり、この間のシグナルが鰓弓間葉におけるDlx6、dHAND(同様に鰓弓の発生に必須であることが知られている核転写因子)の発現に必須であることが示された。また、このET-1/ETARシグナルは下顎の形成に重要であり、その異常は下顎の上額への形質転換を来たすことが示された。

The differentiation of the cells of the dike, all kinds of terminal, endocrine, and pigment cells can be divided into different cells. In this study, the genesis and differentiation of each cell line of the dike cell, the most important purpose of the cell line was explained, (1) the special in vivo of the dike cell was introduced into the cell, and (2) the arch of the cell line of the dike was formed. (1) make sure that the capacitive TVA is used for service purposes. TVA cells of mammalian animals are infected with infectious diseases due to the presence of extraneous animals that are infected with Rcas infection. The special users of the dike and the dike, the TVA, and the special users of the embankment, have entered the trial program. The recipient (ETAR), the epithelium of the arch, the body of the body, the receptacle, the cell, the epithelium, the body, the The information system, the TVA system, and the ETAR system are effective, and the TVA system is responsible for the control and control of the health care system (Tg equipment). The cause of the disease is that the embryo is infected with RcasGFP, and that the rate of cell infection is not affected. CAG, cre-recombinase (cre)-dependent polyadenylation signal fragments, CAG-loxp-CAT-pA-loxp-TVA-ires- β-geo-pA (CAG; chicken β-Geo, CAT; chloramphenicolacetyltransferase pA; polyadenylation signal, β-geo; LacZ-neomycin fusion protein) DNA fragments are maintained by Tg fragments. The specific cre of vascular endothelial cells showed that Tie2-cre cells were mating cells, vascular endothelial cells were TVA cells, and endothelial cells were infected with Rcas cells. From now on, the cre will show that there is a mating behavior in the PO-cre embankment cell, and the special cells of the dike cell may be mating. (2) the center of the dike is formed by the formation of a bow in the center of the center. The results showed that the results showed that the birth rate of the ET-1/ETAR was significantly higher than that of the normal control group (P < 0.05). The results showed that the birth rate of the baby was 8.75-9.5. The results showed that the birth rate of the baby was not affected by the birth of the bow. the results showed that the results showed that the birth of the baby was caused by the birth of the fetal bow. the results showed that the Dlx6 and dHAND must be detected. In the lower part of the ET-1/ETAR, there is an important situation, and the upper part of the box is in the shape of an important one.