細胞特異的遺伝子導入システムを用いた神経堤細胞の発生分化に関わるシグナルの解析

使用细胞特异性基因转移系统分析与神经嵴细胞发育分化相关的信号

• 批准号: 13780592
• 负责人: 福原 茂朋
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780592/
• 关键词: 神経堤細胞; エンドセリン; レトロウイルス; TVA; 遺伝子導入; 鰓弓; シグナル伝達

エンドセリン-1(ET-1)/ETA受容体(ETAR)シグナルは、鰓弓形成に関与する頭部神経堤細胞の発生に重要な役割をしているが、その分子機序については不明な点が多く残されている。本研究では、この疑問を解明するため(1)ETARを発現する頭部神経堤細胞のgreen fluorescence protein (GFP)によるマーキングおよび(2)これら細胞への特異的な遺伝子導入システムの開発を行なった。まず、(1)の系を開発するためETARプロモーターによってGFPが発現するトランスジェニックマウス(ETAR/GFP Tgマウス)を作製した。このETAR/GFP Tgマウス胚を解析した結果、ETARを発現する頭部神経堤細胞においてGFPの発現が認められた。また、ETRAは血管平滑筋細胞にも発現することが知られているが、ETAR/GFP Tgマウスの各種血管においてもGFPの蛍光が観察され、これらGFP陽性細胞はETARを発現する血管平滑筋細胞であることが示された。よって、我々はGFPによるin vivoでのETRA発現細胞のマーキングに成功し、さらにFACS技術を併用することによりこれら細胞の単離を可能にした。ついで、Rcas-TVAシステムを応用して(2)の開発を試みた。TVAはトリレトロウイルス受容体であり、哺乳動物細胞はこの遺伝子を持たないが、TVAを外来的に発現させることによりRcasウイルスによる感染を受けるようになる。そこで、ETARプロモーターによってTVAが発現するトランスジェニックマウスを作製し、ETAR発現細胞特異的遺伝子導入システムの開発を試みた。このマウスの胎仔線維芽細胞系、鰓弓器官培養系、全胚培養系におけるRcasGFPウイルス感染による遺伝子導入効率を検討した結果、すべての系においてGFPの発現が観察され、その有用性が示唆された。今後、これらのシステムを用いて神経堤細胞の発生におけるET-1/ETARシグナルの解析を進めていく。

The ETAR receptor (ET-1) is an important component of brain cell development related to branchial arch formation and molecular mechanism. This study addresses the following questions: (1)ETAR discovery of green fluorescence protein (GFP) in brain cells; and (2) development of cell-specific gene transfer systems. Now, the system of (1) is being developed, and the ETAR/GFP Tg Mars (ETAR/GFP Tg Mars) will be produced when GFP is produced. The ETAR/GFP Tg analysis results show that ETAR is detected in brain cells and GFP is detected in brain cells. ETAR/GFP is the most important indicator of vascular smooth muscle cells. The ETRA gene expression system was successfully developed in vivo using GFP and FACS technology. Rcas-TVA system is used in the development of (2) TVA is the host cell, mammalian cells are the host cell, TVA is the host cell. ETAR develops cell-specific gene expression systems. The efficiency of gene introduction in embryonic line cell line, branchial arch culture line and whole embryo culture line infected with RcasGFP was investigated. The development of GFP in these lines was observed and its usefulness was demonstrated. In the future, the analysis of ET-1/ETAR in the development of brain cells will be further developed.

项目成果

Chikumi et al.: "Regulation of G protein-linked guanine nucleotide exchange factors for Rho, PDZ-RhoGEF and LARG, by tyrosine phosphorylation : Evidence of a role for FAK"J. Biol. Chem.. (in press).

Chikumi 等人：“通过酪氨酸磷酸化调节 Rho、PDZ-RhoGEF 和 LARG 的 G 蛋白连接鸟嘌呤核苷酸交换因子：FAK 作用的证据”J.

Fukuhara et al.: "RGS-containing RhoGEFs : The missing link between transforming G proteins and Rho ?"Oncogene. 20. 1661-1668 (2001)

Fukuhara 等人：“含有 RGS 的 RhoGEF：转化 G 蛋白和 Rho 之间缺失的联系？”癌基因。

Yamaguchi et. et al.: "A novel mouse β-defensin, mBD-6, predominantly expressed in skeletal muscle"J. Biol. Chem.. 276. 31510-31514 (2001)

Yamaguchi 等人：“一种新型小鼠 β-防御素，mBD-6，主要在骨骼肌中表达”J. Biol. 276. 31510-31514 (2001)

Chikumi et al.: "Regulation of G protein-linked guanine nucleotide exchange factors for Rho, PDZ-RhoGEF and LARG, by tyrosine phosphorylation : Evidence of a role for FAK"J.Biol.Chem.. 227. 12463-12467 (2002)

Chikumi 等人：“通过酪氨酸磷酸化调节 Rho、PDZ-RhoGEF 和 LARG 的 G 蛋白连接鸟嘌呤核苷酸交换因子：FAK 作用的证据”J.Biol.Chem.. 227. 12463-12467 (2002

Yamaguchi et al.: "Identification of multiple novel epididymis-specific β-defensin isoforms in the humans and mice"J.Immunol.. 169. 2516-2523 (2002)

Yamaguchi 等人：“人类和小鼠中多种新型附睾特异性 β-防御素亚型的鉴定”J.Immunol.. 169. 2516-2523 (2002)