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細胞特異的遺伝子導入システムを用いた神経堤細胞の発生分化に関わるシグナルの解析

使用细胞特异性基因转移系统分析与神经嵴细胞发育分化相关的信号

基本信息

批准号：
13780592
负责人：
福原茂朋
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

エンドセリン-1(ET-1)/ETA受容体(ETAR)シグナルは、鰓弓形成に関与する頭部神経堤細胞の発生に重要な役割をしているが、その分子機序については不明な点が多く残されている。本研究では、この疑問を解明するため(1)ETARを発現する頭部神経堤細胞のgreen fluorescence protein (GFP)によるマーキングおよび(2)これら細胞への特異的な遺伝子導入システムの開発を行なった。まず、(1)の系を開発するためETARプロモーターによってGFPが発現するトランスジェニックマウス(ETAR/GFP Tgマウス)を作製した。このETAR/GFP Tgマウス胚を解析した結果、ETARを発現する頭部神経堤細胞においてGFPの発現が認められた。また、ETRAは血管平滑筋細胞にも発現することが知られているが、ETAR/GFP Tgマウスの各種血管においてもGFPの蛍光が観察され、これらGFP陽性細胞はETARを発現する血管平滑筋細胞であることが示された。よって、我々はGFPによるin vivoでのETRA発現細胞のマーキングに成功し、さらにFACS技術を併用することによりこれら細胞の単離を可能にした。ついで、Rcas-TVAシステムを応用して(2)の開発を試みた。TVAはトリレトロウイルス受容体であり、哺乳動物細胞はこの遺伝子を持たないが、TVAを外来的に発現させることによりRcasウイルスによる感染を受けるようになる。そこで、ETARプロモーターによってTVAが発現するトランスジェニックマウスを作製し、ETAR発現細胞特異的遺伝子導入システムの開発を試みた。このマウスの胎仔線維芽細胞系、鰓弓器官培養系、全胚培養系におけるRcasGFPウイルス感染による遺伝子導入効率を検討した結果、すべての系においてGFPの発現が観察され、その有用性が示唆された。今後、これらのシステムを用いて神経堤細胞の発生におけるET-1/ETARシグナルの解析を進めていく。

Etamine-1 (ET-1)/ETA receptor (ETAR) シグナルは, gill arch formation にSeki and するHead God経献発生にimportantな佒しているが, その molecular machine sequence については unidentified なpoint が多く residual されている. The answers to questions in this study are (1) ETAR green fluorescence protein in the cells of the head god (GFP) によるマーキングおよび (2) これら cell への-specific な杝子 was introduced into システムの开発を行なった.まず、(1)の性を开発するためETARプロモーターによってGFPが発成するトランスジェニックマウス(ETAR/GFP Tgマウス)をproducedした.このETAR/GFP TgマウスEmbryo analysisした results, ETARを発appearsするHead God経 bank cellsにおいてGFPの発appears and recognizesめられた.また, ETRA, vascular smooth tendon cells, ETAR/GFP TgマウスのVarious blood vesselsにおいてもGFPの蛍光が観看され、これらGFP-positive cellsはETARを発appearsするvascular smooth muscle cellsであることがshowsされた.よって、我々はGFPによるin The success of vivo's ETRA cell isolation and the combination of vivo's FACS technology and the possibility of isolation of cells are possible.ついで、Rcas-TVAシステムを応用して(2)の开発をtrialみた. TVA Receiver Receiver, Mammalian Cell Receiver Receiver, Mammalian Cell Receiver Receiver, T VAを外に発appearsさせることによりRcasウイルスによるInfection けるようになる.そこで、ETAR プロモーターによってTVAが発开するトランスジェニックThe cell-specific genes produced by MASUTAR and ETAR were introduced into SUTAR.このマウスのFetal line fibroblast cell line, branchial arch organ culture system, whole embryo culture system におけるRcasGFPウイルス infection によるThe efficiency of the introduction of the remaining parts is the result, the efficiency of the introduction is the result, the effectiveness of the GFP is the result, and the usefulness is the indicator. From now on, we will use the ET-1 / ETAR シグナルのanalyses of いて神経匌 banks to analyze the results.