Molekulare und funktionelle Charakterisierung von Stamm- und Progenitorzellen der menschlichen Hornhaut

人角膜干细胞和祖细胞的分子和功能表征

• 批准号: 240204035
• 负责人: Professor Dr. Hannes Klump, Ph.D.
• 金额: --
• 依托单位: Klinik für Augenheilkunde
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2012-12-31 至 2016-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/240204035?language=en
• 关键词: Molekulare; und; funktionelle; Charakterisierung; von

Bei vielen Erkrankungen der Augenoberfläche stellt die Stammzellinsuffizienz, die aus dem Verlust der epithelialen Stammzellpopulation der Hornhaut resultiert, ein charakteristisches Merkmal dar. In diesem Fall ist eine chirurgische Erneuerung der Stammzellpopulation durch Transplantation von humanen, im Rahmen eines Tissue-Engineering auf Amnionmembran (AM) expandierten, limbalen Stamm- und Progenitorzellen (LSPZ) auf die Hornhautoberfläche erforderlich. Eine Methode zur Züchtung von LSPZ auf AM wird in der Universitäts-Augenklinik Essen angewandt. Aus wenigen LSPZ, gewonnen aus einer autologen Limbusbiopsie, wird ein transplantationsfähiges Epithel erzeugt. Das Kultursystem ist frei von nicht humanen Substanzen und Zellen. Die Transplantation dieses Limbusepithels führt aber nur in rund 77% der behandelten Fälle zur Stabilisierung der Hornhautoberfläche. Es bleibt unklar, warum in ca. 23% der Fälle ein Transplantatversagen auftritt. Eine Erklärung ist die bisher fehlende aussagekräftige Qualitätsmessung des in vitro generierten Grafts und ein unvollständiges Verständnis der Interaktion der LSPZs mit ihrer Nische, die bei der Zellkultur durch die verwendete AM simuliert wird. Die Qualität der Zellkulturen sollte primär über den dauerhaften Erhalt der LSPZs in vitro definiert werden. Da bis heute ein eindeutiger Biomarker für LSPZs fehlt, wird zu deren Charakterisierung eine Kombination verschiedener Eigenschaften herangezogen. Das hier vorgestellte Projektvorhaben soll sowohl das Verständnis der Stammzellcharakteristika der LSPZs erweitern, als auch den Einfluss der Nische untersuchen. Ziel ist es die Qualität der Zellkultur zu verbessern. Subpopulationen von LSPZs sollen mittels Durchflusszytometrie aus limbalen Zellkulturen isoliert und funktionell charakterisiert werden. Anschließende Microarrayanalysen der so angereicherten Zellen sollen helfen Kandidatengene für limbale “Stemness“ zu finden. Deren Relevanz soll dann mittels ektoper Expression und funktioneller Analyse validiert werden. Durch die Verwendung von unterschiedlich aufbereiteter AM bei der Kultivierung der Zellen, sowohl intaktem als auch deepithelisiertem Gewebe, soll der Einfluss von Faktoren des amniotischen Epithels auf die Ausbildung der Charakteristika der LSPZ untersucht werden.

bevielen Erkrankungen der Augenoberfläche stellt die Stammzellinsuffizienz, die aus dem Verlust der epithelial - alen Stammzellpopulation der Hornhaut resultiert, ein characterissches Merkmal dar。In diesem Fall ist eine chirurgische Erneuerung der Stammzellpopulation durch Transplantation von humanen, In Rahmen eines Tissue-Engineering of amnionmembrane (AM) expansion, limbalen Stamm- und progenorzellen (LSPZ) auf die Hornhautoberfläche erforderlich。[2][方法zur zchtung von LSPZ auf AM wind in der Universitäts-Augenklinik]。[3] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1] [1]Das Kultursystem ist frei von nicht humanen Substanzen and Zellen。死亡移植导致体缘上皮细胞<s:1> hrt细胞死亡，77%的患者死亡Fälle zur Stabilisierung der Hornhautoberfläche。他的研究表明，在大约23%的研究中（Fälle），在移植研究中（Transplantatversagen autritt）。Eine Erklärung ist die bisher fehlende aussagekräftige Qualitätsmessung des in vitro genererten graft and in unvollständiges Verständnis der Interaktion der LSPZs mithrer Nische, die bei der Zellkultur durch die verwendete AM simulert wind。Die Qualität der Zellkulturen solte primär ber den dauerhaften Erhalt der lspz的体外定义研究。研究结果表明，生物标记物（Biomarker）与生物标记物（Biomarker）、生物标记物（Biomarker）、生物标记物（Charakterisierung）、生物标记物（combination）、生物标记物（Eigenschaften herangeogen）之间存在显著差异。在此之前，vorgestellte project （vorhaben）已经被命名为“Verständnis der stammzellcharakteriska der LSPZs”，同时也被命名为“einfuss der Nische untersuchen”。Ziel ist es die Qualität der Zellkultur zu verbessern。LSPZs的亚群sollen mitels， durchflusyzy计量，limbalen， zellculberert和功能细胞特征分析。anschließ - ende微阵列分析仪der so angereicherten Zellen sollen helfen候选基因<s:1> limbale " Stemness " zu finden。Deren correlation and soln mitterer表达式和函数分析有效性。Durch die Verwendung von unterschiedlich aufbereitter AM beder Kultivierung der Zellen，因此，intaktem也包括deep - theelisiersystem Gewebe， soll der infinfuss von Faktoren des羊膜上皮细胞auf die ausbilung der characterteristika der LSPZ untersucht werden。