破骨細胞の小胞輸送に関与する新規遺伝子の同定とその機能

破骨细胞囊泡运输新基因的鉴定及其功能

• 批准号: 16J03008
• 负责人: 山口 優
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J03008/
• 关键词: Rabタンパク質; 破骨細胞; 小胞輸送; 破骨細胞分化

１）Rab44結合タンパク質の同定一般的にRabタンパク質には多くのエフェクタータンパク質が結合して機能する。特に破骨細胞では、極性輸送を示すことから、新規のタンパク質と結合する可能性も十分考えられた。そこでRab44タンパク質に結合するタンパクを同定するために、まず内在性タンパク質について免疫沈降法を行った後、質量分析法を用いて相互作用する分子を同定した。幸い、2分子が同定できた。まだ発表段階ではないためここではその分子の名称は割愛する。なお、結合する可能性が示された分子は再度もう一方に分子の抗体を用いて免疫沈降法で確認している。２）Rab44遺伝子欠損マウスの作成本遺伝子の生体内での機能を探るべく遺伝子欠損マウスを作製し、解析を試みた。作製は既に理化学研究所生体ゲノム工学研究チームに協力を依頼し、CRISPR/Cas9による迅速な作製方法で実行している。受精卵に注入したsgRNA/Cas9 が標的遺伝子の片方もしくは両方のアレルを切断すると変異マウスが得られる。両アレルが破壊された場合には，欠損ホモマウスとなる。卵割したのちにCas9が標的配列を切断するとモザイクマウスが生まれるため区別できる。ホモマウスが誕生したので解析してみるとRab44の発現レベルは若干ではあるが検出できた。詳細な理由は不明であるが、遺伝子の欠失が不完全であったようである。そこでもう一度、全Rab44遺伝子を欠失できるように欠失領域を再設計して、マウスを再作製した。現在はそのヘテロマウスが誕生して、今後はヘテロ同士で交配させる予定である。

1) Rab44 タ ン パ ク qualitative の with standard に Rab タ ン パ ク qualitative に は more く の エ フ ェ ク タ ー タ ン パ ク qualitative が combining し て function す る. Special に osteoclast で は, polar transport を shown す こ と か ら, new rules の タ ン パ ク qualitative と combining す る も very likely test え ら れ た. そ こ で Rab44 タ ン パ ク qualitative に combining す る タ ン パ ク を with fixed す る た め に, ま ず internality タ ン パ ク qualitative に つ い を line っ て immune sink method, quality analysis after た を with い て interaction す を る molecules with fixed し た. The が and 2 molecules が are determined to で た た た. Youdaoplaceholder0 development stage で な な ため ため で そ そ そ そ <s:1> molecular name <e:1> cutting off する. な お, combined す が る possibility in さ れ た molecular は again も う side に molecular の antibody を with い て immune sink method で confirm し て い る. 2) Rab44 heritage 伝 son owe loss マ ウ ス の as cost heritage 伝 の son born in vivo で の function を agent る べ く heritage 伝 son owe loss マ ウ ス を cropping し, parse を try み た. Cropping は both に riken institute birth body ゲ ノ ム engineering research チ ー ム に together を in 頼 し, CRISPR/Cas9 に よ る な cropping method quickly で line be し て い る. Fertilized egg に injection し た sgRNA/Cas9 が mark heritage 伝 son の piece side も し く は struck party の ア レ ル を cut す る と - different マ ウ ス が must ら れ る. Two アレ が が break 壊された situation に, short loss ホモ ウスとなる ウスとなる. Egg cut し た の ち に Cas9 が mark with column を cut す る と モ ザ イ ク マ ウ ス が raw ま れ る た め difference で き る. Born ホ モ マ ウ ス が し た の で parsing し て み る と Rab44 の 発 now レ ベ ル は several で は あ る が 検 out で き た. Detailed な reasons are unknown であるが, remains 伝 are missing が incomplete であったようである. Once そ こ で も う, whole Rab44 heritage 伝 を owe son lost で き る よ う に owe field loss を redesign し て, マ ウ ス を make system し た. Now そ そ ヘテロ ウスが ウスが ウスが is born て て, and in the future, で ヘテロ will mate with で させる is determined である.

项目成果

新規高分子量Gタンパク質Rab44はCa2+流入及びNFATc1経路を介して破骨細胞分化を負に制御する

新型高分子量 G 蛋白 Rab44 通过 Ca2+ 流入和 NFATc1 途径负调节破骨细胞分化

• 发表时间: 2017
• 作者: 山口優，坂井詠子，岡元邦彰，鍛治屋浩，岡部幸司;門脇知子，筑波隆幸
• 通讯作者: 門脇知子，筑波隆幸

Actin binding LIM 1 (abLIM1) negatively controls osteoclastogenesis by regulating cell migration and fusion

• DOI: 10.1002/jcp.26605
• 发表时间: 2019-01-01
• 期刊: JOURNAL OF CELLULAR PHYSIOLOGY
• 影响因子: 5.6
• 作者: Narahara, Haruna;Sakai, Eiko;Tsukuba, Takayuki
• 通讯作者: Tsukuba, Takayuki

破骨細胞分化を制御する新規Rabタンパク質の同定と機能解析

控制破骨细胞分化的新型 Rab 蛋白的鉴定和功能分析

• 发表时间: 2018
• 作者: 小野喜章;江口傑徳;十川千春;奥舎有加;河合穂高;中野敬介;佐々木朗;岡元邦彰;小崎健一;板垣まみ，十川千春，奥舎有加，江口傑徳，小野喜章，岡元邦彰;江口傑徳，小野喜章，奥舎有加，十川千春，内部健太，中野敬介，河合穂高，奥井達雄，岡元邦彰，スチュアート・カルダーウッド;江口傑徳，小野喜章，奥舎有加，藤原敏史，十川千春，Stuart K Calderwood;江口傑徳，奥舎有加，小野喜章，十川千春，岡元邦彰，カルダーウッド スチュアート，小崎 健一;奥舎有加，板垣まみ，十川千春，江口傑徳，岡元邦彰
• 通讯作者: 奥舎有加，板垣まみ，十川千春，江口傑徳，岡元邦彰

破骨細胞分化を負に制御する新規Kelchタンパク質の同定と機能解析

负调节破骨细胞分化的新型 Kelch 蛋白的鉴定和功能分析

• 发表时间: 2017
• 作者: 楢原峻;坂井詠子;山口優;楢原春菜;門脇知子;岡元邦彰;朝比奈泉;筑波隆幸
• 通讯作者: 筑波隆幸

破骨細胞分化を制御する新規Rabタンパク質の同定と解析

控制破骨细胞分化的新型 Rab 蛋白的鉴定和分析

• 发表时间: 2017
• 作者: 山口優;坂井詠子;岡元邦彰;門脇知子;筑波隆幸
• 通讯作者: 筑波隆幸