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ｍＲＮＡ細胞内送達による不死化因子の導入と細胞移植治療への応用

通过细胞内递送mRNA引入永生化因子及其在细胞移植治疗中的应用

基本信息

批准号：
16J05842
负责人：
松井秋倫
金额：
$ 0.83万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞移植では、疾患領域で虚血や炎症といった微小環境の劇的な変化が生じた結果、移植細胞に誘発される細胞死の経路も異なることが想定される。これまで、初代培養肝細胞の生着率を向上させるために、細胞死抑制因子Bcl-2 mRNAを用いていたが、移植環境によって最適な細胞死抑制因子を選定することが高い生着率に繋がると考えた。そこで、酸化ストレス、栄養枯渇、炎症分子といった複数の細胞死を誘発させるモデルを開発し、Bcl-2、XIAP、Survivin、HSP27、Aktといった因子による抗細胞死効果を検証した。XIAPやSurvivinはBcl-2より下流で機能し、HSP27やAktはBcl-2の上流で機能する。酸化ストレスにおいては過酸化水素処理を行なうことで、栄養枯渇においては、グルコース枯渇及び低酸素処理を行なうことで、炎症分子においてはTNF-αを処理することで、細胞死を誘発させた。細胞死抑制効果を検証した結果、細胞死抑制因子を導入することで、アポトーシスだけでなく、ネクローシスも抑制することができた。一方で、因子間の細胞死抑制効果には著明な差は観察されなかった。Bcl-2に関して、mRNAとpDNAの形で導入した場合、細胞死抑制効果は、pDNAと比較してmRNAで高いことが明らかとなった。これは、mRNAではその発現に核移行が不要であるため標的細胞の殆どに細胞死抑制効果が得られたと考えられた。一方で、pDNAを用いた場合では、少数の標的細胞にしか細胞死抑制効果が得られなったためと考えられた。続いて、細胞移植における細胞死抑制因子mRNA導入の有効性を検証するために間葉系幹細胞に対して、生着率について評価したところ、皮下移植において、細胞死抑制因子を導入することで、mRNA未導入群と比較して、有意に生着した。このことより、本システムは初代培養肝細胞だけでなく、他の細胞種にも展開可能であることが示唆された。

Cell transplantation is the result of changes in the micro-environment caused by blood deficiency and inflammation in the disease field, and cell death is the result of changes in the micro-environment caused by changes in the micro-environment caused by inflammation. The survival rate of primary cultured hepatocytes was increased, and the expression of Bcl-2 mRNA was determined. The optimal survival rate of primary cultured hepatocytes was determined by the selection of Bcl-2 mRNA. Anti-cell death effects are demonstrated by the development of Bcl-2, XIAP, Survivin, HSP27, Akt and other factors. XIAP and Survivin have downstream functions of Bcl-2, and HSP27 and Akt have upstream functions of Bcl-2. Acidification, nutrition, and low levels of TNF-αCell death inhibitory effect test results, cell death inhibitory factor introduction, cell death inhibitory effect test results, cell death inhibitory effect test results A party, the factor between the cell death inhibition effect is clear, the difference between the detection Bcl-2 gene expression and pDNA gene expression are closely related to cell death. The expression of mRNA in the target cells was inhibited. A small number of target cells were found to inhibit cell death when pDNA was used. In the case of cell transplantation, there is evidence of effective induction of suppressor of cell death mRNA. In the case of mesenchymal stem cells, there is evidence of evaluation of the rate of induction of suppressor of cell death mRNA. In the case of subcutaneous transplantation, there is evidence of effective induction of suppressor of cell death mRNA. In the case of non-induction of suppressor of cell death mRNA, there is evidence of intentional induction. This is the case with primary cultured hepatocytes.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

抗アポトーシス因子mRNAのex vivo導入による初代肝細胞の移植効率改善

离体引入抗凋亡因子mRNA提高原代肝细胞移植效率

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
J.-B. Thiebot;J. P. Y. Arnould;A. Gomez-Laich;K. Ito;A. Kato;T. Mattern;H. Mitamura;T. Noda;T. Poupart;F. Quintana;T. Raclot;Y. Ropert-Coudert;J. E. Sala;P. J. Seddon;G. J. Sutton;K. Yoda;A. Takahashi;松井秋倫
通讯作者：
松井秋倫

抗アポトーシス因子Bcl-2 mRNA導入による初代肝細胞移植効率の向上

引入抗凋亡因子Bcl-2 mRNA提高原代肝细胞移植效率