インフルエンザウイルスのゲノムパッケージングにおけるＭ２タンパク質の機能解析

流感病毒基因组包装中M2蛋白的功能分析

• 批准号: 17J00495
• 负责人: 山形 優太朗
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-26 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J00495/
• 关键词: インフルエンザウイルス; ゲノムパッケージング; ウイルス; パッケージング

2019年度は、インフルエンザウイルスのM2蛋白質の細胞質領域との相互作用を介してゲノムパッケージングに寄与する可能性が昨年度の研究で示唆された宿主因子CACYBPに着目して研究を進めた。Crispr-Cas9を用いてCACYBPノックアウト細胞を作製し、種々のウイルス株を用いてそれらの増殖への影響を調べた。結果、WSN株ではA549とA549ΔCACYBPとで増殖効率にあまり変化がなかったのに対し、pdm2009株やH3N2株(Victoria)ではCACYBPのノックダウンによりウイルスの増殖効率が大きく減少したことがわかった。また、インフルエンザウイルスのゲノムパッケージング機構の解明という観点から、M2細胞質領域と同じくパッケージングへの関与が先行研究で示唆されているPB2分節vRNA内部領域欠損変異、特に244DI変異に着目して研究を進めた。初めに、244DI変異ウイルスをクローン培養する実験系を構築し、その成果を論文にまとめて発表した。次に、244DI分節によるウイルス増殖抑制の詳細な機構の解明を目指して、クローン培養した244DIウイルスを用いて性状の解析を進めた。クライオ電子顕微鏡解析やRT-qPCRによるvRNAの相対定量等の手法を通した性状解析の結果、244DI変異により244DI分節以外の7分節の取込効率が大きく減少しており、244DI変異がインフルエンザウイルスのゲノムパッケージングに影響を及ぼす可能性が示唆された。このように2019年度は多角的な視点からインフルエンザウイルスのゲノムパッケージングについての研究を進めた。また、論文の投稿や学会での発表を通して、これらの研究成果を外部に積極的に発信した。

In the year 2019, there was a significant increase in the number of M2 protein

项目成果

PB2発現細胞を用いたDIインフルエンザウイルスのクローン培養

使用 PB2 表达细胞克隆培养 DI 流感病毒

• 发表时间: 2019
• 作者: 山形優太朗;藤田陽子;宮本翔;中野雅博;村本裕紀子;野田岳志
• 通讯作者: 野田岳志

インフルエンザウイルスM2の細胞質領域と相互作用する宿主因子の探索

寻找与流感病毒 M2 细胞质区域相互作用的宿主因子

• 发表时间: 2019
• 作者: 山形優太朗;宮本翔;村本裕紀子;中野雅博;野田岳志
• 通讯作者: 野田岳志

Generation of a purely clonal DI virus

纯克隆 DI 病毒的产生

• 发表时间: 2019
• 作者: Yutaro Yamagata;Yukiko Muramoto;Sho Miyamoto;Keiko Shindo;Masahiro Nakano;Takeshi Noda.
• 通讯作者: Takeshi Noda.

クローン培養された欠損干渉インフルエンザウイルスの性状解析

克隆培养的缺陷型干扰流感病毒的表征

• 发表时间: 2020
• 作者: 山形優太朗;村本裕紀子;宮本翔;藤田陽子;中野雅博;野田岳志
• 通讯作者: 野田岳志

Generation of a purely clonal defective interfering influenza virus.

纯克隆缺陷型干扰流感病毒的产生。

• DOI: 10.1111/1348-0421.12681
• 发表时间: 2019
• 期刊: Microbiol Immunol.
• 作者: Yamagata Y;Muramoto Y;Miyamoto S;Shindo K;Nakano M;Noda T.
• 通讯作者: Noda T.