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冷凍保存可能な花粉を活用した新奇ゲノム編集技術の開発

利用冷冻花粉开发新型基因组编辑技术

基本信息

批准号：
21K19115
负责人：
吉田健太郎
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

パールミレットは、多くの穂を作り、それぞの穂から大量の花粉を取ることができる。さらに、花粉は、乾燥・凍結耐性能をもち、-80度で保存することができる。また、ムギ類との亜科間交雑をした場合、パールミレットの染色体が選択的に脱落することから、ムギ類の倍加半数体を作成することも可能である。本研究では、パールミレットのこの特性を活かし、亜科間交雑による染色体脱落現象を利用した倍加半数体技術とゲノム編集技術を融合し形質転換体の作出が困難なコムギでゲノム編集を1世代で可能にする新しい技術を開発することを目的とする。本年度は、アグロバクテリウムを利用したパールミレットの安定形質転換技術の確立を試みた。MS培地におけるスクロース、カルス化を誘導する2,4-Dの濃度を調節することにより、未熟種子だけでなく、完熟種子からでも再分化能を持つ白いカルスを得ることができることを確認した。また、カルスへのアグロバクテリウム形質転換を試みた。緑色蛍光タンパク質GFP遺伝子の導入によって、カルスの一部にGFP蛍光を検出した。しかし、まだパールミレットの安定形質転換を作出するには至っていない。安定形質転換を用いずに、直接、花粉にゲノム編集に必要なタンパク質（CAS9）と核酸（gRNA）を導入する試験もした。まず、花粉の卵細胞へのデリバリー試薬を検討した。その結果、パールミレットの花粉は、有機溶媒や、リポフェクション試薬に耐性があり、試薬中に花粉管を伸長することができることを確認した。

A lot of pollen is collected from a large amount of pollen, and a lot of pollen is collected. Heat, pollen, drying, tolerance, storage at-80 degrees. The number of exfoliated chromosomes selected by each other is more than 50%, and the number of samples selected by each other is doubled to make it possible to change the size of each other. The purpose of this study is to improve the characteristics of chromosome exfoliation and chromosome exfoliation in cross-sectional communication in this study. in this study, the characteristics of chromosome exfoliation and chromosome exfoliation are analyzed in this study. in this study, the chromosome exfoliation image of the cross-sectional communication system and the chromosome exfoliation image of the cross-sectional communication system are analyzed in this study. it is possible that the first generation of the new technology will lead to the development of new technology. This year, we will make use of the information technology to ensure the establishment of a trial program. The MS is used to determine the temperature, temperature Please do not know what to do. Please do not know what to do. Color, light, GFP, light, GFP, light, color, light, color, color, light, color, light, color, GFP, light, color, color, light, color, light, Make sure that you don't know what to do, and that you don't know what to do. Diazepam is required to insert nucleic acid (CAS9) nucleic acid (gRNA) into the database by direct, direct, and pollen editing. Pollen, egg, egg, The results of the experiment, the results of the results, the results, the results