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Visualization of turnover history of membrane proteins in CNS neuron

CNS 神经元膜蛋白周转历史的可视化

基本信息

批准号：
21K19350
负责人：
岡村康司
金额：
$ 4.08万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度、Nav1.6-GFPノックインマウスの脳において、GFP蛍光が観察されなかったが、顕微鏡の感度を上げて注意深く観察し直したところ、明確なGFP蛍光シグナルが中枢ニューロンのAISや末梢神経軸索のnode of Ranvierに見出された。次に、Cre-LoxPシステムによる遺伝子組み換えによって、本系統の遺伝子改変マウスにおいてGFP融合タンパク質からtdTomatoの融合タンパク質へと転換できるかどうか確認することを目的に、海馬よりニューロンを培養し、AAVウィルスを用いてCre-recombinaseを強制発現させ、共焦点蛍光顕微鏡を用いてGFPとtdTomatoの両方の蛍光シグナルを観察した。その結果、AAV ウィルスの感染後３日ほどでGFPからtdTomatoへの蛍光シグナルの変化が観察された。すなわち、新旧のNav1.6タンパク質の入れ替えが生じていることが明らかになった。さらに、時間を追って、AISでのGFPおよびtdTomatoの分布を観察したところ、感染後6日で、ほぼAIS全体にわたってtdTomatoのシグナルが広がることが確認された。GFPとtdTomatoの分布（長さ、位置）を比較したところ、tdTomato（新たに合成されたタンパク質）が軸索において長い距離分布しているのに対し、GFP（古いタンパク質）の分布は短い距離であった。さらに、時期を変えて、感染後の長期にわたって蛍光シグナルの変化を観察したところ、感染後18日間でGFPの蛍光シグナルはほぼ見られなくなった。これらの結果から、培養海馬ニューロンでは、Nav1.6は、18日間でほぼ完全に入れ替わり、新たな分子の組み込みはAIS全体で生じるものの、古い分子の消失は軸索の近位―遠位軸に沿って均一でなく、両端もしくは片端に顕著に生じる可能性が考えられた。

Last year, Nav1.6-GFP was sensitive, GFP was sensitive, micro-sensitivity was sensitive, and the GFP was clear that the center was sensitive to AIS, and the node of Ranvier was used to detect the error. Secondary, Cre-LoxP, AAV, etc., sub-system, and AAV. The confocal light micrometer uses the GFP tdTomato to observe the light. The results showed that 3 days after infection, AAV infection was confirmed by GFP, tdTomato, light, and chemical examination. Please tell me that the new and old Nav1.6 will not be able to make a living for you. Monitoring, time tracking, AIS

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

SLC34 Na+/Piトランスポーターのリン酸輸送機能の理解

了解 SLC34 Na+/Pi 转运蛋白的磷酸盐转运功能

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Okochi Y;Junxian Zhou;Mizutani N;Shiozaki Y;Segawa H;Okamura Y
通讯作者：
Okamura Y

How are Voltage Signal and Enzyme Coupled? : S4 approaches the hydrophobic spine of the enzyme in voltage-sensing phosphatase, VSP

电压信号和酶如何耦合？

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Junji Miyabe;Ryuichi Ohgaki;Keijiro Saito;Ling Wei;Suguru Okuda;Shushi Nagamori;Hiroshi Ohki;Kazuo Yoshino;Hidenori Inohara;Yoshikatsu Kanai;Okamura Y
通讯作者：
Okamura Y

Role of K364 next to the active site cysteine in voltage-dependent phosphatase activity of Ci-VSP

DOI：
10.1016/j.bpj.2023.01.022
发表时间：
2023-06-06
期刊：
BIOPHYSICAL JOURNAL
影响因子：
3.4
作者：
Paixao，Ian Costa;Mizutani，Natsuki;Okamura，Yasushi
通讯作者：
Okamura，Yasushi

腎臓で機能するNa-Pi cotransporter SLC34A3のイオン輸送の仕組みの解明

阐明在肾脏中发挥作用的 Na-Pi 协同转运蛋白 SLC34A3 的离子转运机制

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
周俊先;大河内善史;水谷夏希;塩﨑雄治;瀬川博子;岡村康司
通讯作者：
岡村康司

Insight into the function of a unique voltage-sensor protein (TMEM266) and its short form in mouse cerebellum

深入了解小鼠小脑中独特电压传感器蛋白 (TMEM266) 的功能及其短形式

DOI：
10.1042/bcj20220033
发表时间：
2022
期刊：
Biochemical Journal
影响因子：
4.1
作者：
Kawai T;Narita H;Konno K;Akter S;Andriani RT;Iwasaki H;Nishikawa S;Yokoi N;Fukata Y;Fukata M;Wiriyasermkul P;Kongpracha P;Nagamori S;Takao K;Miyakawa T;Abe M;Sakimura K;Watanabe M;Nakagawa A;Okamura Y
通讯作者：
Okamura Y

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岡村康司其他文献

Chondroitin sulfate characterized by the E disaccharide unit is a potent inhibitor of herpes simplex virus infectivity and provides binding sites for the virus binding to gro2C cells

以 E 双糖单元为特征的硫酸软骨素是单纯疱疹病毒感染性的有效抑制剂，并为病毒与 gro2C 细胞的结合提供结合位点

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Biol.Chem. 280(37)
影响因子：
0
作者：
Okamaoto H.;T.Nishizawa;K.Sato;S.Otake;M.Sensu;T.Takemura;N.Sugimoto;I.Matsui;A.Shimizu;H.Kumagai;Y.Ohno;T.Takano;T.Nakajima;西澤智明;杉本伸夫;村田喜理;岡村康司;Y.Murata;Bergefall Kicki
通讯作者：
Bergefall Kicki