权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

老化・疾病に伴いミトコンドリア内に生じるタンパク質凝集解析モデルの構築

构建分析线粒体内由于衰老和疾病而发生的蛋白质聚集的模型

基本信息

批准号：
21K19717
负责人：
松島雄一
金额：
$ 3.99万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19717/
关键词：
ミトコンドリアタンパク質凝集体凝集体タンパク質凝集

项目摘要

生体内で生じるタンパク質凝集は、誤って折り畳まれたタンパク質が細胞内または細胞外で不溶化し高密度の集合体(=凝集体)を形成する現象であり、近年このタンパク質凝集と疾病や老化との関係性に注目が集まっている。ミトコンドリアにおいても電子顕微鏡を用いた組織切片の解析により、老化や疾病に伴い脳や骨格筋の一部のミトコンドリア内部(マトリクス)に凝集体が観察される。しかし、ミトコンドリアマトリクスに生じる凝集体の効率の良い検出法やミトコンドリアマトリクスの凝集体解析に用いる簡便なモデル実験系が存在しないため、この凝集体がミトコンドリアに与える影響については不明である。本研究はミトコンドリアマトリクスに生じる凝集体解析の足がかりとして、ミトコンドリアマトリクスに生じる凝集体解析モデルの構築及びこの凝集体を検出する方法の開発を目的とする。本年度はミトコンドリア内部にタンパク質凝集体を生じる凝集体検出法の開発および凝集体解析モデルの構築とその評価を行った。CODAS (脳・眼・歯・耳介・骨格)症候群の原因遺伝子であるミトコンドリアマトリクス局在プロテアーゼLONP1の機能が低下した患者細胞では、ミトコンドリアマトリクスにタンパク質凝集体が形成されることが知られている。そこで以下に示す2つの方法でミトコンドリアマトリクス凝集体モデルを作成した。(i)培養細胞に対しsiRNAを用いたノックダウン法によってLONP1の機能を低下させると、ミトコンドリア内にタンパク質凝集体が形成されることを確認した。(ii)LONP1は6量体構造をとりATPの加水分解のエネルギーを利用し機能している。そこで、培養細胞を用いて薬剤誘導プロモーター下でATPase活性変異型LONP1を発現させドミナントネガティブ法でLONP1の機能を低下させと、ミトコンドリア内にタンパク質凝集体が形成されることを確認した。

In recent years, attention has been focused on the relationship between protein aggregation, disease and aging. Microscopic electron microscopy was used to analyze tissue sections, and to examine the internal aggregates of bone tissue associated with aging and disease. A simple method for the analysis of aggregates is presented. The system exists and the effect of aggregates is unknown. The purpose of this study is to develop a method for the analysis of aggregates generated by the formation of aggregates and the detection of aggregates. This year, the development and evaluation of the development and construction of the condensation group analysis method for the internal separation of the condensation group was carried out. CODAS (Eye, Tooth, Ear, Bone) Syndrome: Causes and Pathogenesis of Cell Formation in Patients with Low Function of LONP1. The following is a description of the method used to create a collection of samples. (i)To confirm the function of LONP1 in cultured cells by siRNA (ii) LONP1 has a 6-dimensional structure and functions for ATP hydrolysis. In this study, we identified the expression of LONP1 in cultured cells by enzyme induction and the formation of LONP1 protein aggregates.