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硫酸代謝に着目した口唇口蓋裂の発症機構解明の基盤研究

以硫酸盐代谢为重点阐明唇腭裂发病机制的基础研究

基本信息

批准号：
22K10242
负责人：
岡綾香
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

【目的】硫酸イオン代謝の異常がどのように口唇口蓋裂をはじめとした顎顔面の形態形成や骨形成異常を引き起こすかを明らかにすること【方法】マウスを用いて、頭蓋顎顔面が形成される胎生9.5日から16.5日における硫酸トランスポーター遺伝子群の発現部位をin situ ハイブリダイゼーション法にて確認した。さらに、絶対定量QPCR解析で各硫酸トランスポーター遺伝子のCopy numberを算出した。CRISPR/CAS9遺伝子編集技術によりSlc26a2ノックアウトマウスを作製し、ノックアウトマウス胎児の透明骨格標本を作製し、マイクロCTの撮影を行い、形態学的観察を行った。【結果および考察】E9.5以降の各発生段階で、Slc26a2遺伝子がマウス上下顎骨において発現量が増加し、Slc26a2の発現はSlc26a1に比べて優位であることがわかった。そこで、Slc26a2 遺伝子のノックアウトマウス（以下Slc26a2-KO）を作製したところ、Slc26a2-KO はすべて出直後致死であった。E18.5で取り出したSlc26a2-KO のマウス胎仔は、対照群と比較して、四肢の短小化、顎顔面領域の軟骨低形成、上顎骨の前後方向の低形成が明らかとなり、長管骨の長径は短く、短径は長くなることを示した。これらのことから、頭蓋顎顔面領域において、Slc26a2トランスポーターを介した細胞内への硫酸イオンの取り込みが、頭蓋顎顔面の形態形成異常に重要な役割を果たしていることを示した。

【 objective 】 sulfate イオン abnormal metabolism のがどのように oral flap crack をはじめとした jaw facial の morphogenetic や abnormal bone formation を lead き up こすかを Ming らかにすること【 methods 】マウスを with いて, cranium jaw facial が formation される viviparous 9.5 day から 16.5 day における sulfate トランスポーター heritage 伝 subgroup の発 department now The をin situ ハブリダブリダゼゼショショにて method にて confirms たた. Youdaoplaceholder0, absolute quantitative QPCR is used to analyze the Copy number of the 伝 sequents of each sulfuric acid トラトラスポタタタをを and calculate the たた. Compiling technology CRISPR/CAS9 posthumous son 伝により Slc26a2 ノックアウトマウスを as し, ノックアウトマウス tire where のし, the transparent bone specimens を cropping マイクロ CT の pinch of shadow lines をい, morphology of 観 examine をった. 【 results および investigation 】 E9.5 in の born each 発 Duan Jie で, Slc26a2 but 伝がマウス jaws bone において発 now quantity が raised し, Slc26a2 の発 now は Slc26a1 に than べて primacy であることがわかった. そこで, Slc26a2 but 伝のノックアウトマウス (" を Slc26a2 - KO) for making したところ, Slc26a2 - KO はすべて out straight after death であった. E18.5 で take り out した Slc26a2 - KO のマウス tire は, according to the group of seaborne と compare して, limb の, short of jaw facial areas の cartilage formation, low direction before and after the upper jaw bone ののが Ming らかとなり, long tube bone の short length to diameter はく, long short diameter はくなることを shown した. これらのことから, jaw facial cranium において, Slc26a2 トランスポーターを interface した intracellular への sulfate イオンの take り込みが, cranium jaw facial の morphogenetic abnormal に important な "を cut fruit たしていることを shown した.