駆除対象草本植物の飼料化に適した白色腐朽菌の分子育種

适合作为待灭草本植物饲料的白腐真菌的分子育种

• 批准号: 22K05937
• 负责人: 入江 俊一
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: The University of Shiga Prefecture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05937/
• 关键词: 食用きのこ; シイタケ; ひらたけ; ゲノム編集; 飼料; CRISPR/Cas9; 白色腐朽菌; 養殖飼料

ヒラタケにおいて組換えにあたらない遺伝子改変系を開発を目指すため、CRISPR/Cas9発現カセット遺伝子の一時的導入による目的遺伝子の破壊を試みた。その結果、複数の目的遺伝子破壊株を得ることができ、それらの多くにCas9遺伝子が含まれていなかった。これにより、RNPとは異なり選択マーカー遺伝子によりゲノム編集株を素早く選抜できる非組換え遺伝子改変系の開発につながる技術の開発ができた。シイタケは我が国においてヒラタケ以上に有名な食用担子菌である。種村らによると植物由来飼料に対する高い性能改善効果が期待される（種村ら　Aquaculture 2016;453:130-134）。しかし、ヒラタケ以上に遺伝子工学的実験手法の開発が遅れており、遺伝子機能解析に必須である遺伝子ターゲティングの成功例も存在しない。ドナーベクターのみ用いたシイタケpyrG遺伝子の相同組換え（HR）による破壊を3回試行したところ22個/実験のカルボキシン耐性株を得ることができたが、HR体は含まれていなかった。これによりシイタケにおいても他の真正担子菌綱の菌類と同様にHRよりもNHEJが優先的に起こることが示された。次に、pyrG遺伝子を切断するように調製したCRISPR/Cas9カセットを持つCas9ベクターとの共導入実験を行った。3回の試行で36個/実験のカルボキシン耐性株を得ることができた。このうち7株についてはHRによるシイタケpyrG遺伝子の破壊が確認された。Cas9遺伝子配列のゲノムPCRを行ったところ、7株中5株については増幅が確認できなかった。得られたΔpyrG株を宿主としてシイタケpyrG遺伝子の導入を2回繰り返したところ、平均6個/実験の原栄養体を得ることができた。これにより新規選択マーカー遺伝子としてもシイタケpyrG遺伝子を利用できることが示された。

CRISPR/Cas9 is a new generation of CRISPR/Cas9. It is a new generation of CRISPR/Cas9. The result is that the number of target genes is equal to that of the number of target genes, which is equal to that of the number of target genes. The development of technology for the development of non-structural genetic modification systems The name of the species is Basidiomycetes. The results of improved plant performance are expected (Aquaculture 2016;453:130-134). The development of the implementation method of genetic engineering must be completed, and the successful example of genetic engineering must exist. The same composition of pyrG gene (HR) was tested in 3 times. The resistant strain was tested in 22 times. HR gene was tested in 3 times. This is the first time that we've had a chance to talk to each other. CRISPR/Cas9 is the key to the success of this project. 3. The trial run of 36/10 was completed. 7 strains of the virus are detected in the HR system. Cas9 gene alignment must be confirmed by PCR, and 5 of the 7 strains must be confirmed. The number of PyrG genes introduced into the host cell was 2 times higher than that of the control group, and the number of PyrG genes introduced into the host cell was 6 times higher than that of the control group. Therefore, the new regulations on the selection of ー ー

项目成果

ヒラタケにおけるPKAcホモログの機能

平菇中 PKAc 同系物的功能

• 发表时间: 2023
• 作者: Koshi Daishiro;Ueshima Hiroki;Kawauchi Moriyuki;Nakazawa Takehito;Sakamoto Masahiro;Hirata Mana;Izumitsu Kosuke;Sumita Takuya;Irie Toshikazu;Honda Yoichi;神谷彩音，上島拓輝，本田与一，佐藤利次，上辻久敏，西田翔太，稲垣翔太，泉津弘佑，住田卓也，入江俊一;仲島駿太，平田麻菜，上島拓輝，本田与一，内田貴己，泉津弘佑，住田卓也，入江俊一
• 通讯作者: 仲島駿太，平田麻菜，上島拓輝，本田与一，内田貴己，泉津弘佑，住田卓也，入江俊一

CRISPR/Cas9発現カセットの一時的導入によるシイタケPyrGの相同組換え

临时导入 CRISPR/Cas9 表达盒对香菇 PyrG 进行同源重组

• 发表时间: 2022
• 作者: 神谷彩音;上島拓輝1;本田与一;佐藤利次;上辻久敏;西田翔太;稲垣翔太;泉津弘佑;住田卓也;入江俊一
• 通讯作者: 入江俊一

Marker-free genome editing in the edible mushroom, Pleurotus ostreatus, using transient expression of genes required for CRISPR/Cas9 and for selection

• DOI: 10.1186/s10086-022-02033-6
• 发表时间: 2022-12-01
• 期刊: JOURNAL OF WOOD SCIENCE
• 影响因子: 2.9
• 作者: Koshi, Daishiro;Ueshima, Hiroki;Honda, Yoichi
• 通讯作者: Honda, Yoichi