膵癌の発生と進展におけるGirdin遺伝子の役割：癌幹細胞の新生と癌浸潤への関与

1)膵癌幹細胞マーカーの検討：マウスにおける膵癌モデルであるKPCマウスにおいてはDoublecortin-like kinase 1(Dclk1)が幹細胞マーカーとして特異性が高いと報告されるが、ヒト膵癌でDclk1免疫染色を行ったところ、発現様式と陽性細胞の割合には検体ごとに大きな差が見られた。癌幹細胞マーカーはマウスとヒトでの差異が大きいと考えられたため、当初の計画ではDclk1を利用した計画を立てていたが、利用する癌幹細胞マーカーについて再検討する事とした。2)実験系の検討：本研究計画ではKPCマウスの使用を予定したが、上記の結果を考慮し、ヒト膵癌の細胞株・組織・オルガノイドを利用した実験系を優先する事とした。受精鶏卵を用いた培養系を試したところ、実体顕微鏡を用いた観察では分解能が低いために、個細胞レベルでのライブイメージングは困難であることが分かった。代替手法として、膵臓の器官培養および膵癌培養に適するとの報告があった豚膀胱の間質組織を基質に用いて、各種の膵癌細胞株の3D培養を試みた。2週間の培養後に組織を調べると、癌細胞は重なりあって増殖し、腺管構造や間質浸潤も見られるなど、生体での癌病変を模倣した組織像を呈し、蛍光顕微鏡による経時的観察が可能であったことから、今後の研究に利用することとした。3)ミトコンドリア機能が及ぼす影響の検討：癌幹細胞の低酸素環境への適合性から、酸素を消費するミトコンドリアとの関連に着目し、ミトコンドリア活性化作用を有する ”mitochonic acid 5” を培養液に添加してsphere assay を行なった。通常酸素濃度下においてsphereの数には変化がなかったものの、sphereのサイズ縮小や腺腔形成が誘導されたことから、ミトコンドリア機能が癌の分化に影響を与える可能性が示唆された。

1)膵癌幹細胞マーカーの検討：マウスにおける膵癌モデルであるKPCマウスにおいてはDoublecortin-like kinase 1(Dclk1)が幹細胞マーカーとして特異性が高いと報告されるが、ヒト膵癌でDclk1免疫染色を行ったところ、発現様式と陽性細胞の割合には検体ごとに大きな差が見られた。癌幹細胞マーカーはマウスとヒトでの差異が大きいと考えられたため、当初の計画ではDclk1を利用した計画を立てていたが、利用する癌幹細胞マーカーについて再検討する事とした。2)実験系の検討：本研究計画ではKPCマウスの使用を予定したが、上記の結果を考慮し、ヒト膵癌の細胞株・組織・オルガノイドを利用した実験系を優先する事とした。受精鶏卵を用いた培養系を試したところ、実体顕微鏡を用いた観察では分解能が低いために、個細胞レベルでのライブイメージングは困難であることが分かった。代替手法として、膵臓の器官培養および膵癌培養に適するとの報告があった豚膀胱の間質組織を基質に用いて、各種の膵癌細胞株の3D培養を試みた。2週間の培養後に組織を調べると、癌細胞は重なりあって増殖し、腺管構造や間質浸潤も見られるなど、生体での癌病変を模倣した組織像を呈し、蛍光顕微鏡による経時的観察が可能であったことから、今後の研究に利用することとした。3)ミトコンドリア機能が及ぼす影響の検討：癌幹細胞の低酸素環境への適合性から、酸素を消費するミトコンドリアとの関連に着目し、ミトコンドリア活性化作用を有する ”mitochonic acid 5” を培養液に添加してsphere assay を行なった。通常酸素濃度下においてsphereの数には変化がなかったものの、sphereのサイズ縮小や腺腔形成が誘導されたことから、ミトコンドリア機能が癌の分化に影響を与える可能性が示唆された。