Study of the role of MID1 in tauopathies and its application as a therapeutic target

MID1在tau蛋白病中的作用及其作为治疗靶点的应用研究

基本信息

  • 批准号:
    22K07370
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.75万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2022
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2022-04-01 至 2025-03-31
  • 项目状态:
    未结题

项目摘要

ヒトmidline-1(MID1)を恒常的に安定発現する細胞株を作製した。ヒト胎児腎細胞293(HEK293T細胞)からクローニングしたヒトmidline-1(MID1)配列をpIRESpuro3プラスミドベクターにサブクローニングした(pIRESpuro3-MID1)。また、MID1のN末端側またはC末端側に緑色蛍光タンパク質(EGFP)を融合したタンパク質(EGFP-MID1またはMID1-EGFP)を発現するためのpIRESpuro3プラスミドベクターも作製した(pIRESpuro3-EGFP-MID1またはpIRESpuro3-MID1-EGFP)。これらのプラスミドベクターをHEK293T細胞にトランスフェクションし、ピューロマイシンで選択後、1細胞を単離して培養することで、クローン細胞株を得た。マウスおよびヒトの両方を認識する抗MID1抗体の選定を実施した。市販されている5つの抗体について、ウェスタンブロッティングにおける検出を指標にして検討したところ、4つがヒト細胞株(HEK293T)でMID1に相当する分子量のバンドが検出されたが、うち2つは同時に多数のバンドも検出された。一方、5つの抗体のいずれもマウス脳抽出物ではMid1に相当するバンドは検出されなかったことから、マウス脳におけるMid1を検出するためには抽出方法を検討する必要があると考える。ヒトMID1については特異的に認識する抗体2つを選定できたことから、今後はこれらの抗体を用いて、タウの病的変化におけるMID1の機能について解析を進める予定である。
正常的免疫稳定性嗜酸性粒细胞株作为免疫抑制剂。HEK 293 T细胞293(HEK 293 T细胞)的免疫原性和免疫原性midline-1(MID 1)配列pIRESpuro 3-MID 1。重组质粒pIRESpuro3-EGFP-MID 1-EGFP,pIRESpuro3-MID1-EGFP,pIRESpuro 3-MID1-EGFP。HEK293T细胞凋亡抑制剂、HEK293 T细胞凋亡原告方提出上诉,要求被告方反对MID1抗体鉴定妨碍措施。市售鸡胚抗原阳性5例,鸡胚抗原阴性2例,鸡胚抗原阴性2例,鸡胚抗原阴性4例,鸡胚癌细胞株(HEK293T)阳性1例,MID阴性1例,同等数量的鸡胚抗原阳性2例。一方,5种抗体均能正常分泌,提取物中的Mid1相当接近正常分泌,提取物中的Mid1不需要任何提取方法,提取物中的Mid1必须经过严格的测试。免疫球蛋白MID1免疫球蛋白受体特异性的免疫球蛋白抗体2确定免疫球蛋白受体,免疫球蛋白受体特异性抗体应用受体,免疫球蛋白病的免疫球蛋白MID1特异性能免疫球蛋白受体解析免疫球蛋白赋予确定免疫球蛋白。

项目成果

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