免疫系細胞とヒトiPSニューロン共培養系によるASDの病態解析

先行して行っていた、健常者２名由来のiPS細胞株から分化誘導した興奮性ニューロンと、末梢血単核球から誘導したマクロファージの共培養系を用いた解析を確認した。定型発達者および自閉スペクトラム症患者、各群３名づつの解析は終了していたが、自閉スペクトラム症のHeterogeneity性を考慮して、各群5名づつに対象を増やして、計１０名の末梢血単核球由来マクロファージを得て解析を行った。M１マクロファージにおける炎症性サイトカインの高発現と、M１マクロファージがiPS細胞由来興奮性ニューロンの樹状突起を退縮させる効果について、自閉スペクトラム症群で有意に高いことを確認した。また、炎症性サイトカインについては２種類が影響を与えていると思われることを見出した。確認ができた対象者のうち、まず、定型発達者１名、自閉スペクトラム症患者１名の協力を得て、末梢静脈血を得て、マクロファージの誘導に加え、各種T細胞の分離培養法の確立を行っている。CD４陽性T細胞の分離については可能であると考えられる。CD４陽性CD２５陽性のRegulatory T細胞についても分離はできていると考えられる。同対象者から得たマクロファージにこれらT細胞が与える影響については、トランスウェルアッセイを開始している。現在までのところ、マクロファージの発現する炎症性サイトカインに与える影響について、qRT-PCRなどで確認中である。

先行して行っていた、健常者２名由来のiPS細胞株から分化誘導した興奮性ニューロンと、末梢血単核球から誘導したマクロファージの共培養系を用いた解析を確認した。定型発達者および自閉スペクトラム症患者、各群３名づつの解析は終了していたが、自閉スペクトラム症のHeterogeneity性を考慮して、各群5名づつに対象を増やして、計１０名の末梢血単核球由来マクロファージを得て解析を行った。M１マクロファージにおける炎症性サイトカインの高発現と、M１マクロファージがiPS細胞由来興奮性ニューロンの樹状突起を退縮させる効果について、自閉スペクトラム症群で有意に高いことを確認した。また、炎症性サイトカインについては２種類が影響を与えていると思われることを見出した。確認ができた対象者のうち、まず、定型発達者１名、自閉スペクトラム症患者１名の協力を得て、末梢静脈血を得て、マクロファージの誘導に加え、各種T細胞の分離培養法の確立を行っている。CD４陽性T細胞の分離については可能であると考えられる。CD４陽性CD２５陽性のRegulatory T細胞についても分離はできていると考えられる。同対象者から得たマクロファージにこれらT細胞が与える影響については、トランスウェルアッセイを開始している。現在までのところ、マクロファージの発現する炎症性サイトカインに与える影響について、qRT-PCRなどで確認中である。