肺構成細胞特異的な脂質メディエーター分解促進による抗線維化機構の解明

通过促进肺成分细胞特异性脂质介质的降解阐明抗纤维化机制

• 批准号: 22K08295
• 负责人: 岡本 安雄
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08295/
• 关键词: 線維化; 脂質メディエーター; 脂質メディエーター分解酵素; 肺線維症

「線維化肺では、スフィンゴシン1-リン酸（S1P）とリゾホスファチジン酸（LPA）の分解酵素脂質リン酸ホスファターゼ3（LPP3）の発現低下がS1PとLPAの蓄積を引き起こし、線維化を促進する。」という仮説を検証するために、組織特異的にLPP3を高発現するマウスおよび組換えアデノ随伴ウイルスゼロタイプ6（AAV6）.2FFの作製を行った。Rosa26遺伝子座にCAGプロモーター制御下で、Cre組換え酵素によりloxP配列に挟まれた発現阻止配列を除去するとLPP3を高発現するように遺伝子操作したLPP3ノックイン（LPP3-KI）マウスを2021年度に作製したが、Creマウスと交配後、Cre-loxPシステムによるLPP3の発現が認められなかった。用いた条件付きLPP3発現フラグメントから発現阻止配列内の不必要と考えられる箇所を削除し、約3 kbの条件付きLPP3発現フラグメントを作製した。2022年度文部科学省新学術領域先端モデル動物支援プラットフォーム・モデル動物作製支援を受け、CRISPR/Cas9を用いたノックイン技術を用いてマウスを作出した。計17匹が生まれ、生存した11匹のマウスの尾からゲノムDNAを抽出し、雄マウス1匹のみが挿入部位のN末およびC末のアウトサイドプライマーを用いたPCRで予想されるバンドが増幅されたことから、このマウスを候補マウスとした。また、作出された候補マウスとBL/6マウスを交配し、得られたLPP3-KIマウスから胎仔線維芽細胞を単離し、Cre組み換え酵素を導入することによりCre-loxPシステムによる発現阻止配列の除去の確認およびLPP3タンパク発現を確認した。肺に指向性の高いアデノ随伴ウイルスゼロタイプ6（AAV6）を用いた肺でLPP3を高発現するマウスを作製するために、肺でLPP3を高発現するAAV6.2FFを作製した。

"Line d lung で は, ス フ ィ ン ゴ シ ン 1 - リ ン acid (S1P) と リ ゾ ホ ス フ ァ チ ジ ン fatty acid (LPA) の decomposition enzyme リ ン acid ホ ス フ ァ タ ー ゼ 3 (LPP3) の 発 now low が S1P と LPA の accumulation を lead き up こ し, line d を promote す る." Said と い う 仮 を 検 card す る た め に, tissue specific に LPP3 を high 発 now す る マ ウ ス お よ び group in え ア デ ノ with accompanying ウ イ ル ス ゼ ロ タ イ プ 6 (AAV6). 2 the ff の cropping を line っ た. Rosa26 heritage 伝 stroma に the CAG プ ロ モ ー タ ー で under the suppression, the Cre group in え enzyme に よ り loxP match column に carry ま れ た 発 now stop with column を remove す る と LPP3 を high 発 now す る よ う に heritage 伝 sub operations し た LPP3 ノ ッ ク イ ン (LPP3 - KI) マ ウ ス を 2021 に cropping し た が, Cre マ ウ ス After と mating, re-loxp システムによるLPP3 shows が recognition められな った った. With い た conditions pay き LPP3 発 now フ ラ グ メ ン ト か ら 発 now stop with column の unnecessary と exam え ら れ る a を pruned by し, about 3 KB の condition pay き LPP3 発 now フ ラ グ メ ン ト を cropping し た. 2022 year's science province new academic field apex モ デ ル animals support プ ラ ッ ト フ ォ ー ム · モ デ ル animal system support the を け, CRISPR/Cas9 を with い た ノ ッ ク イ ン technology を with い て マ ウ ス を make し た. Born 17 horse が ま れ, survival し た 11 horse の マ ウ ス の tail か ら ゲ ノ ム DNA を spare し, male マ ウ ス 1 horse の み が の scions into parts at the end of the N お よ び C late の ア ウ ト サ イ ド プ ラ イ マ ー を with い た PCR で to think さ れ る バ ン ド が rights of さ れ た こ と か ら, こ の マ ウ ス を alternate マ ウ ス と し た. ま た, make さ れ た alternate マ ウ ス と BL / 6 マ ウ ス を し, and mating ら れ た LPP3 - KI マ ウ ス か ら tire seed line d を bud cells from し 単, Cre み in え enzyme を import す る こ と に よ り Cre - loxP シ ス テ ム に よ る 発 now stop with column の remove の confirm お よ び LPP3 タ ン パ ク 発 を now confirmed し た. High lung に directivity の い ア デ ノ with accompanying ウ イ ル ス ゼ ロ タ イ プ 6 (AAV6) を い た lung で LPP3 を high 発 now す る マ ウ ス を cropping す る た め に, lung で LPP3 を high 発 now す る AAV6.2 FF を cropping し た.

项目成果

肺線維症におけるリゾリン脂質メディエーター分解酵素の役割

溶血磷脂介质降解酶在肺纤维化中的作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 松井玲奈;竹之内康広;北風圭介;杉本理栄;石丸浩靖;坪井一人;岡本安雄
• 通讯作者: 岡本安雄

Acid ceramidase as a third N-acylethanolamine hydrolase in cells and tissues

酸性神经酰胺酶作为细胞和组织中的第三种 N-酰基乙醇胺水解酶

• 发表时间: 2022
• 作者: Kazuhito Tsuboi;Tatsuya Tai;Ryouhei Yamashita;Hanif Ali;Takashi Watanabe;Toru Uyama;Yoko Okamoto;Keisuke Kitakaze;Yasuhiro Takenouchi;Iffat Ara Sonia Rahman;Hitoshi Houchi;Tamotsu Tanaka;Akira Tokumura;Junko Matsuda;Yasuo Okamoto;Natsuo Ued
• 通讯作者: Natsuo Ued

グリセロホスホジエステラーゼ7は小胞体内腔における環状ホスファチジン酸の産生酵素である

甘油磷酸二酯酶 7 是一种在内质网腔中产生环状磷脂酸的酶。

• 发表时间: 2022
• 作者: 北風圭介;坪井一人;Hanif Ali;木本来希;竹之内康広;石丸浩靖;山下純;上田夏生;田中保;岡本安雄
• 通讯作者: 岡本安雄

肺線維症における老化肺胞上皮細胞の役割

衰老肺泡上皮细胞在肺纤维化中的作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 竹之内康広;北風圭介;杉本理栄;石丸浩靖;坪井一人;岡本安雄
• 通讯作者: 岡本安雄

線維化肺における脂質メディエーター分解酵素の発現低下メカニズム

纤维化肺中脂质介质降解酶表达降低的机制

• 发表时间: 2023
• 作者: 岡本安雄;竹之内康広;北風圭介;松井玲奈;石丸浩靖;杉本理栄;坪井一人
• 通讯作者: 坪井一人