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エンドセリン受容体の脱感作機構

内皮素受体的脱敏机制

基本信息

批准号：
10770039
负责人：
岡本安雄
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770039/
关键词：
エンドセリン受容体脱感作機構

项目摘要

本年度、申請者はエンドセリンA受容体(ETA)の細胞内移行経路およびその調節機構を検討した。まず、ETAの細胞内移行経路を明らかにする目的で、ETAの細胞質内アミノ末端部位にmycを挿入したETA(myc-ETA)を安定発現させたCHO細胞株を用いて、以下の実験結果を得た。ET-1刺激により、ETAがカベオラを介して、細胞内へ移行した、ETAのアンタゴニスト刺激では、ETAは細胞内へ移行しなかった、ET-1刺激により、ETAと共にカベオラに特異的に存在する蛋白質カベオリンも細胞内へ移行した、カベオリンを細胞内へ移行させる薬物で細胞を処理すると、ETAの細胞内移行に変化は見られないが、利用する経路がカベオラからクラスリン被覆小胞に変化した。以上の結果から、CHO細胞において、ETAの細胞内移行はアゴニスト依存性であること、ETAの細胞内移行経路はカベオラがdefault pathwayであること、ETAのカベオラを介する細胞内移行にカベオリンが必要であること、ETAはカベオラもクラスリン被覆小胞も両方利用できることが明らかになった(投稿準備中)。さらに、申請者は、ETAの細胞内移行におけるETAの細胞質内カルボキシル(C)末端部位の役割を明らかにする目的で、myc-ETAの細胞質内C末端部の383番目までを削除した受容体(myc-Δ383)を安定発現させたCHO細胞株を用いて、以下の実験結果を得た。myc-Δ383はリガンド結合能はmyc-ETAと同様であるが、G蛋白質(Gq,Gs)との共役、ET-1によるリン酸化および細胞内移行が完全に失われた。以上の結果から、ETAの細胞質内C末端部位はETAの細胞内移行、G蛋白質との共役およびリン酸化に必要であることが明らかになった。来年度はETAの細胞内移行にどのsignalingが必要であるのか、受容体のどの部位が必要であるのかを検討する。

This year, the applicant is investigating the intracellular migration pathway and regulatory mechanisms of ETA receptors. The following results were obtained for the stable development of CHO cell lines with ETA(myc-ETA) and ETA(myc-ETA) intracellular migration pathway. ET-1 stimulation, ETA migration, ETA stimulation, ETA intracellular migration, ET-1 stimulation, ETA co-stimulation, ETA intracellular migration, ET-1 stimulation, ETA co-stimulation, ETA co-stimulation, etc. Specific presence of protein, ETA intracellular migration, ETA, ET Use the circuit to change the color of the coated cells. The above results show that CHO cell migration, ETA's intracellular migration, and its dependence on host cells, ETA's intracellular migration pathway, and ETA's intracellular migration pathway are necessary. ETA's intracellular migration pathway, and ETA's intracellular migration pathway are necessary. In addition, the applicant was able to remove the 383 position of the cytoplasmic C-terminal part of myc-ETA and stably develop CHO cell lines. The following results were obtained. Myc-Δ383 is a protein that binds to myc-ETA, G protein (Gq,Gs), ET-1, and intracellular migration. The above results show that the intracellular C-terminal site of ETA is not the intracellular migration of ETA, and the co-activity and acidification of G protein are necessary. In the future, ETA will be discussed in terms of signaling and receptor location.