Structural analyses of B-cell co-receptor related to SLE

SLE相关B细胞辅助受体的结构分析

基本信息

批准号：
22K08560
负责人：
伊藤暢聡
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08560/
关键词：
Ｘ線結晶構造解析 B細胞自己免疫疾患蛋白質間相互作用

项目摘要

本研究では、B細胞の抑制性共受容体であるCD72とリガンドとの相互作用の解明を目的としており、初年度である本年度は、以下のような研究を行った。これまでに我々はマウス由来CD72リガンド結合ドメイン(CTLD)の結晶構造を報告しているが、ヒトのCD72のCTLDの構造解析も目指していた。マウスと比較して、ヒトCD72-CTLDには長いループ領域が挿入されており、結晶化の妨げとなっている可能性があった。そこでこのループを欠失（短絡）させたコンストラクトを設計して発現させていたが、今年度はその結晶化と構造解析に成功した。マウスCD72-CTLDはリガンド結合部位と想定される場所に、正電荷の集積が見られ、リガンドであるSm/RNPのRNA部分と相互作用することが示唆されたが、今回結晶構造が得られたヒトのCD72-CTLDではそのような正電荷の集積は見られず、リガンドとの相互作用において、少なくともヒトの系では電荷に依存しない相互作用様式があることが強く示唆された。なお、上述のループを欠失させていないコンストラクトによるCD72-CTLDの発現・精製しているが結晶化には至っていない。また、CD72のリガンドの一つである自己抗原分子Sm/RNPとCD72との複合体試料の調製法の検討を行った。ループ部分の有無による２種類のCD72-CTLDを用いて、表面プラズモン共鳴法（SPR）やELISA法定量的な解析を行った。

这项研究旨在阐明CD72（B细胞的抑制性共受体和配体）之间的相互作用，在今年的第一年中，进行了以下研究。迄今为止，我们报道了小鼠衍生的CD72配体结合结构域（CTLD）的晶体结构，但我们还旨在分析人类CD72 CTLD的结构分析。与小鼠相比，人CD72-CTLD插入了很长的循环区域，这可能会干扰结晶。因此，我们设计并表达了一种删除（短路）此循环的构造，但是今年我们成功地进行了结晶和结构分析。小鼠CD72-CTLD在该位点积聚了正负电荷，该位点被假定为配体结合位点，表明它与配体SM/RNP的RNA部分相互作用，但是在人类CD72-CTLD中并未观察到这种正电荷的积累，这在人类CD72-CTLD中并没有在晶体结构中获得一个与人类的相互作用的相互作用，这是一种与人类相互作用的相互作用。此外，CD72-CTLD通过未删除上述环的构造表达和纯化，但尚未结晶。此外，我们研究了制备自身抗原分子SM/RNP的复杂样品的方法，该方法是CD72的配体之一和CD72。使用两种类型的CD72-CTLD来分析表面等离子体共振（SPR）和ELISA定量分析。