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Structural analyses of B-cell co-receptor related to SLE

SLE相关B细胞辅助受体的结构分析

基本信息

批准号：
22K08560
负责人：
伊藤暢聡
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08560/
关键词：
Ｘ線結晶構造解析 B細胞自己免疫疾患蛋白質間相互作用

项目摘要

本研究では、B細胞の抑制性共受容体であるCD72とリガンドとの相互作用の解明を目的としており、初年度である本年度は、以下のような研究を行った。これまでに我々はマウス由来CD72リガンド結合ドメイン(CTLD)の結晶構造を報告しているが、ヒトのCD72のCTLDの構造解析も目指していた。マウスと比較して、ヒトCD72-CTLDには長いループ領域が挿入されており、結晶化の妨げとなっている可能性があった。そこでこのループを欠失（短絡）させたコンストラクトを設計して発現させていたが、今年度はその結晶化と構造解析に成功した。マウスCD72-CTLDはリガンド結合部位と想定される場所に、正電荷の集積が見られ、リガンドであるSm/RNPのRNA部分と相互作用することが示唆されたが、今回結晶構造が得られたヒトのCD72-CTLDではそのような正電荷の集積は見られず、リガンドとの相互作用において、少なくともヒトの系では電荷に依存しない相互作用様式があることが強く示唆された。なお、上述のループを欠失させていないコンストラクトによるCD72-CTLDの発現・精製しているが結晶化には至っていない。また、CD72のリガンドの一つである自己抗原分子Sm/RNPとCD72との複合体試料の調製法の検討を行った。ループ部分の有無による２種類のCD72-CTLDを用いて、表面プラズモン共鳴法（SPR）やELISA法定量的な解析を行った。

The purpose of this research is to clarify the interaction of CD72 and CD23, the inhibitory receptor of B cells. In the first year of this year, the following research will be carried out. The crystal structure of CD72 is reported in this paper, and the structure analysis of CD72 is indicated in the paper. CD72-CTLD has the possibility of crystallization. The structure analysis of this paper is successful. CD72-CTLD is a crystalline structure that combines positive charge accumulation and interaction with Sm/RNP RNA. The interaction formula of charge dependence is used to describe the relationship between charge dependence and interaction. In addition, the above-mentioned products can be used to produce and refine CD72-CTLD. The preparation of Sm/RNP and CD72 complex samples was discussed. Two types of CD72-CTLD were analyzed by PCR, SPR and ELISA.