Analysis of immune responses induced by intranasal administration of B. pertussis vaccine candidates

百日咳は、百日咳菌によって引き起こされる急性呼吸器感染症であり、ワクチンにより予防可能な疾患とされている。しかしながら、近年本国のみならず世界的に百日咳患者の増加が認められている。原因として、ワクチン効果が弱いこと、最近の流行株の抗原性がワクチン株のそれと乖離していること、ワクチン接種法、ならびに獲得した免疫が長期に渡って維持されないことが問題として考えられているが、詳細は未だに明らかになっていない。本研究課題では、日本発の百日咳無細胞ワクチンに不足している部分を百日咳菌由来の膜小胞（Membrane Vesicles; MVs）の添加で補いつつ、呼吸器感染症の防御に重要な呼吸器粘膜上の分泌型IgA抗体も誘導できる経鼻百日咳ワクチンの可能性を評価することを目的とする。今年度は、百日咳菌由来のMVsに含まれる主要防御抗原の評価を行った。現行の無細胞ワクチンの元になるTohama株をCFDN寒天培地に播種し菌体を回収後、菌体を洗浄し、フィルターろ過した洗浄液を超遠心して得た沈渣をMVsとして回収した。ロット間誤差を評価するため、3ロットのMVsを得た。主要防御抗原と考えられるFHA、FimならびにPrnをウェスタンブロットで検出したところ、ロット間で大きな差はなく含有されることが示唆された。また、当初MVsには含まれないと考えていた百日咳毒素（PT）もMVsに含まれることが明らかになった。今後は、今回得たMVsを抗原とした経鼻ワクチン接種による抗体応答ならびに防御効果を検討する。この際、MVsに不活化百日咳毒素を添加する必要があるか否かを検討する予定である。

百日咳は、百日咳菌によって引き起こされる急性呼吸器感染症であり、ワクチンにより予防可能な疾患とされている。しかしながら、近年本国のみならず世界的に百日咳患者の増加が認められている。原因として、ワクチン効果が弱いこと、最近の流行株の抗原性がワクチン株のそれと乖離していること、ワクチン接種法、ならびに獲得した免疫が長期に渡って維持されないことが問題として考えられているが、詳細は未だに明らかになっていない。本研究課題では、日本発の百日咳無細胞ワクチンに不足している部分を百日咳菌由来の膜小胞（Membrane Vesicles; MVs）の添加で補いつつ、呼吸器感染症の防御に重要な呼吸器粘膜上の分泌型IgA抗体も誘導できる経鼻百日咳ワクチンの可能性を評価することを目的とする。今年度は、百日咳菌由来のMVsに含まれる主要防御抗原の評価を行った。現行の無細胞ワクチンの元になるTohama株をCFDN寒天培地に播種し菌体を回収後、菌体を洗浄し、フィルターろ過した洗浄液を超遠心して得た沈渣をMVsとして回収した。ロット間誤差を評価するため、3ロットのMVsを得た。主要防御抗原と考えられるFHA、FimならびにPrnをウェスタンブロットで検出したところ、ロット間で大きな差はなく含有されることが示唆された。また、当初MVsには含まれないと考えていた百日咳毒素（PT）もMVsに含まれることが明らかになった。今後は、今回得たMVsを抗原とした経鼻ワクチン接種による抗体応答ならびに防御効果を検討する。この際、MVsに不活化百日咳毒素を添加する必要があるか否かを検討する予定である。