p38MAPKを介した網膜ミュラー細胞の増殖とグリオーシスの制御機構の解明

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本研究の目的は、網膜傷害後に起きるミュラーグリアの増殖、脱分化、反応性グリオーシスの相互関連性とその仲介因子としてのp38の役割を明らかにすることにある。本年度は、ミュラーグリアの増殖と遺伝子発現を定量的に解析するための新規実験モデルを確立し、さらに阻害剤を用いたp38の機能解析を行った。我々はこれまでげっ歯類にメチルニトロソ尿素（MNU）を腹腔内投与することで視細胞変性モデルを作製し、傷害後のミュラーグリア増殖制御機構を解析してきたが、新たにメタンスルホン酸メチル（MMS）を用いた視細胞変性モデルの確立を進めており、網膜傷害およびミュラーグリアの反応性増殖の経過がMNUモデルとMMSモデルで異なること、MMS毒性に対する神経細胞の感受性がマウスとラットで異なることを明らかにした。また、MMS投与後に網膜を器官培養する実験系を確立するとともに、チミジンブロック法によりミュラーグリアの増殖を阻害し、細胞周期に依存した遺伝子発現変化を同定するための実験モデルを作製した。さらにミュラーグリアを分散培養により増殖させ、培養ミュラーグリアの核内タンパク質発現を画像解析により定量化し、種々の制御因子発現と細胞周期との関連性を解析する手法を確立することができた。これらの新規に確立した実験系を用いて、p38の機能解析を開始した。MMS投与後のラット網膜をp38阻害因子の存在下で器官培養したところ、ミュラーグリアの増殖および変性領域への細胞移動がp38阻害により有意に亢進することが明らかになった。したがって、p38が網膜傷害後のミュラーグリアの増殖および細胞移動を抑制的に制御していることが示された。