GPIアンカータンパク質によるシグナル伝達におけるスフィンゴ糖脂質の役割

鞘糖脂在 GPI 锚定蛋白信号转导中的作用

• 批准号: 09878130
• 负责人: 笠原 浩二
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878130/
• 关键词: ガングリオシド; スフィンゴ糖脂質; srcファミリーキナーゼ; ミクロドメイン; カベオラ

申請者は神経系におけるガングリオシドの機能の解明を目的として、抗ガングリオシド抗体で免疫沈降する際に共沈してくる蛋白質の同定を試みた。ラット脳TritonX-100遠心上清の抗ガングリオシドGD3抗体による免疫沈降物に[γ-^<32>P]ATPを加えたところ、分子量53,56kDaの蛋白質の特異的なチロシンリン酸化が検出された。ペプチドマッピングおよび免疫沈降実験から、srcファミリーチロシンキナーゼLynであることがわかった。CHO細胞(ガングリオシドとしてGM3のみ発現、GM3はGD3合成酵素の基質)にガングリオシドGD3合成酵素遺伝子およびLyn遺伝子のcDNAを共発現させたところ、抗GD3抗体でLyn活性が共沈し、抗Lyn抗体でガングリオシドGD3が共沈した。抗GD3抗体はラット小脳初代培養ニューロンにおいてLynを活性化し、一過性のチロシンリン酸化を引き起こした。さらにショ糖密度勾配遠心で、ラット小脳LynおよびCHO細胞に発現させたLynはスフィンゴ脂質マイクロドメイン画分に回収された。CHO細胞にGD3合成酵素cDNAを発現させたところ、抗GD3抗体でカベオリン(マイクロドメインマーカー蛋白質)が共沈した。以上の結果から、ガングリオシドGD3はラット脳膜上のスフィンゴ脂質マイクロドメインにおいてLynと結合しており、その活性を制御している可能性が考えられる。

The applicant is trying to identify the protein identity of the protein in the immune system by clarifying the function of the protein in the immune system and by immunizing the antibody against the protein in the immune system Triton X-100 is a protein with <32>molecular weight of 53,56kDa. The specific protein of [γ-^ P]ATP is added to the immune precipitate produced by anti-GD3 antibody in the serum. The first is the first time that a child has been infected with a virus. CHO cells (GM3 gene expression, GM3 substrate for GD3 synthase) co-express GD3 synthase gene and Lyn gene cDNA, anti-GD3 antibody co-express Lyn activity, anti-Lyn antibody co-express GD3 gene. Anti-GD3 antibody was activated and transiently acidified in primary culture. In addition, the concentration of glucose in the plasma was adjusted to the concentration of glucose in the plasma, and the concentration of glucose in the plasma was adjusted to the concentration of glucose in plasma. CHO cells GD3 synthase cDNA is produced and anti-GD3 antibodies are co-expressed. The above results show that the activity of GD3 is inhibited by the combination of lipid and lipid in the membrane.

项目成果

Kohji Kasahara et al.: "Kinases and phosphatases in lymphocyte and neuronal signaling" Yakura H.ed.Springer-Verlag, 2 (1997)

Kohji Kasahara 等人：“淋巴细胞和神经元信号传导中的激酶和磷酸酶” Yakura H.ed.Springer-Verlag，2 (1997)

Kohji Kasahara et al.: "Association of src family tyrosine kinase Lyn with ganglioside GD3 in rat brain.Possible regulation of Lyn by glycosphingolipid in caveolae-like domains." Journal of Biological Chemistry. 272(47). 29947-29953 (1997)

Kohji Kasahara 等人：“大鼠大脑中 src 家族酪氨酸激酶 Lyn 与神经节苷脂 GD3 的关联。在小窝样结构域中鞘糖脂可能对 Lyn 进行调节。”

笠原浩二: "蛋白質核酸酵素" 共立出版, 2 (1997)

笠原浩司：《蛋白质核酸酶》共立书刊，2 (1997)