糖脂質シアル酸転移酵素の単離精製

糖脂唾液酸转移酶的分离纯化

• 批准号: 07770097
• 负责人: 笠原 浩二
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770097/
• 关键词: ガングリオシドGM3; GM3合成酵素; 糖脂質シアル酸転移酵素

糖脂質シアル酸転移酵素は膜内在性の酵素であること、抽出した酵素が不安定であること、活性測定が煩雑であることなどから、精製の成功しているものは数少なく、その生化学的性質はあまり分かっていない。本研究では、前年度新たに開発した簡便な糖脂質シアル酸転移酵素活性測定法を用いて、ガングリオシドGM3合成酵素の単離精製を試みた。精製材料を検討したところ、GM3合成酵素は豚顎下腺に比較的豊富に含まれていることが分かり、よって豚顎下腺を用いて精製を試みることにした。各種アフィニティークロマトグラフィーを検討したところ、P11 Phosphocellulose, Blue Sepharose, ConA S epharose, LacCer固定化カラムの順で効果的に精製でき、比活性をそれぞれで約5,3,5,30倍上げることができた。完全精製には10万倍以上の精製度が要求されることが予想され、ビオチン化LacCerを使った新しい精製法を検討した。酵素基質であるLacCerのビオチン化にはNHS-SS-Biotinを用いた。アルカリ処理によりLacCerのリゾ体をつくり、有機溶媒中でNHS-SS-Biotinと反応させた。ビオチン化LacCerは逆相カラムを使ったHPLCにより精製した。精製したビオチン化LacCerはGM3合成酵素の良い基質になった。現在、GM3合成酵素とビオチン化LacCerの複合体を形成させアビジンカラムにより精製する条件を検討している。

Glycolipid, acid transfer enzyme, membrane intrinsic enzyme, extractive enzyme, unstable enzyme, activity assay, bioassay, biochemistry, biochemistry and biochemistry. In this study, in the previous year, we launched a new method for measuring the activity of glycolipid, glycolipid, acid transferase, and GM3 synthesis enzyme isolation from seminal fluid. The sperm material, the GM3 synthesis enzyme, the lower gland of the dolphin, the lower gland of the dolphin, and the lower gland of the dolphin, the sperm and the lower gland of the dolphin. The precision and specific activity of all kinds of immobilized Phosphocellulose, Blue Sepharose, ConA Sepharose and LacCer were about 5% and 30 times higher than that of 5% and 5% respectively. The complete precision is more than 100000 times. It requires that you want to know what you want, and that you can change the LacCer to make you feel better. Enzyme base, LacCer, enzyme, enzyme, NHS-SS-Biotin, enzyme, enzyme. It is necessary to regulate the anti-drug activity of LacCer in organic solvents and NHS-SS-Biotin in organic solvents. The reverse phase of the LacCer is required to improve the quality of the HPLC. The synthesis of LacCer, GM3, enzyme, enzyme, enzyme and enzyme were studied. At present, the GM3 synthesis enzyme is used to transform the LacCer complex to form a complex.

项目成果

Kuroki, T. et al.: "Skin Cancer: Mechanisms and Human Relerance" CRC Press, Inc. (Muktar. H. ed.), 7 (1994)

Kuroki, T. 等人：“皮肤癌：机制和人类相关性”CRC Press, Inc. (Muktar. H. ed.), 7 (1994)

Kasahara, K. et al.: "Enzymatic assay of glycosphingolipid sialyltransferase using reverse-phase thin-layer chromatography." Anal. Biochem.218. 224-226 (1994)

Kasahara, K. 等人：“使用反相薄层色谱法对鞘糖脂唾液酸转移酶进行酶法测定。”