受容体のリガンド結合領域を用いた新しいリガンド探索用プローブの開発

利用受体的配体结合区域开发用于配体检测的新探针

• 批准号: 09877436
• 负责人: 伊藤 信行
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877436/
• 关键词: FGF; 受容体; リガンド; 発現; 増殖因子

FGFはペプチド性細胞増殖因子で,現在,16のmemberからなるfamilyを形成している。FGFはチロシンキナーゼ型受容体,FGFR,介してその作用を発現する。我々はFGF familyに属する親規シグナル分子を探索するために,組換えFGFRのリガンド結合領域を作成し,そのリガンド結合活性を調べた。ラットFGFRのリガンド結合領域である細胞外ドメインに検出用,精製用タグをそのC-末端に付加した組換えタンパク質をコードするcDNAをbaculovirus発現ベクターに組込み,昆虫細胞でFGFRの細胞外ドメインを発現した。発現したFGFRの細胞外ドメインは検出用のE-tagをanti E-tag抗体を用いて検出した。その結果,昆虫細胞で発現したFGFRの細胞外ドメインは効率良く細胞外へと分泌された。さらに,細胞外に分泌されたFGFRの細胞外ドメインをNi-affinity columnを用いたaffinity chromatographyにより精製した。精製されたFGFRの細胞外ドメインは約60kDaのタンパク質であることが明らかになった。精製FGFRの細胞外のリガンド結合活性を表面プラズマ共鳴法を原理とするBiosensor,BIOCORE,を用いて検討した。精製FGFRの細胞外ドメインをセンサーチップに固定し,リガンドとして,aFGF,bFGFを用いてその結合活性を測定した。FGFRの細胞外ドメインはaFGFと解離平衡定数2.1x10^<-8>,bFGFと解離平衡定数1x10^<-8>の親和性を示した。組換えFGFRの細胞外ドメインは昆虫細胞で高収量で産生され,その結合活性を保持していることが明らかになった。従って,本研究で得られた精製FGFRの細胞外ドメインは,FGF受容体の親規リガンド探索に有用なプローブになるものと期待される。

FGF has been infected with cytoplasmic factors. Now, 16% member cells have formed family cells. FGF receptor receptor, FGFR, mediate the effect of this drug on the body. Our FGF family is a kind of molecular exploration device, which is used to explore the molecular structure of the disease, to combine the FGFR information with the field to form the device, and to combine the activity with the active one. In combination with the field-wide application of extracellular FGFR, we used the C-terminal phosphorescence to detect the molecular weight of cDNA, and the insect cell to detect the extracellular DNA of FGFR. We can see that the FGFR antibody was extracted from the extracellular domain and the anti E-tag antibody of the E-tag antibody was extracted from the cell. The results showed that there was a good rate of FGFR secretion in insect cells. The extracellular secretion, FGFR, extracellular Ni-affinity column, affinity chromatography, sperm, etc. We need to know that the extracellular FGFR is very sensitive to 60kDa. The principle of the method of combining the extracellular FGFR with the active surfactant was to determine the Biosensor,BIOCORE, and then to use it. The FGFR and aFGF,bFGF were determined by the combination of extracellular and bioactive agents. FGFR

项目成果

Miyake.et al.: "structure and expression of a novel member,FGF-16,of the FGF family" Biochem.Biophys.Res.Commun.243. 148-152 (1998)

Miyake.等人：“FGF家族新成员FGF-16的结构和表达”Biochem.Biophys.Res.Commun.243。

Hoshikawa b: "structure and expression of a novel fibroblast growth factor,FGF-17,preferentially expressed in the embryonic brain" Biochem.Biophys.Res.Commun.印刷中. (1998)

Hoshikawa b：“一种新型成纤维细胞生长因子 FGF-17 的结构和表达，优先在胚胎脑中表达”Biochem.Biophys.Res.Commun.In press（1998）。