バイオセンサーとDDSを活用した肝細胞内サイトゾール中遊離型薬物濃度の実測-モノクローナル抗体封入膜融合リポソームを用いた試み

使用生物传感器和 DDS 实际测量肝细胞胞浆中的游离药物浓度 - 使用单克隆抗体封装的膜融合脂质体进行试验

• 批准号: 09877457
• 负责人: 澤田 康文
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877457/
• 关键词: 肝細胞; 遊離型薬物濃度; 膜融合リポソーム; モノクローナル抗体; 肝細胞内遊離形薬物濃度

本研究は肝細胞内遊離形薬物濃度の実測を目的に、キニジンの抗体を封入した膜融合リポソームを用いた肝細胞内遊離形薬物濃度の定量法の確立を行った。膜融合リポソームの調製はホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、コレステロールを重量比4.8:1:2で混合し、溶媒を留去することにより脂質薄膜を作成した。これに抗体溶液を添加し、振とうすることによりリポソームを調製した。調製したリポソームに紫外線照射により不活性化したセンダイウイルス(HVJ)を加え、4℃で30分、37℃で2時間インキユベーションした後に融合していないHVJをショ糖密度勾配遠心により除去し、抗体封入膜融合リポソーム(HVJ-Lip)を調製した。膜融合リポソームによる肝細胞内遊離形キニジン濃度の測定は常法に従い肝細胞を調製し、膜融合リポソームを用い、抗キニジン抗体あるいはコントロール抗体を細胞内に導入した。この細胞を用い、[^3H]キニジンの取り込み実験を行い、可溶化後放射活性を測定した。抗キニジン抗体を導入した肝細胞においてコントロール抗体を導入肝細胞と比較し、高いキニジンの取り込みが認められた。また、膜融合能がないリポソームによる抗キニジン抗体、コントロール抗体導入後の肝細胞によるキニジンの取り込みにほとんど差は認められなかった。さらに、キニジンの取り込みにおける抗体未封入の膜融合リポソームあるいは膜融合能がないリポソームの影響は認められなかった。以上の結果より、膜融合リポソームを用いることにより細胞内遊離形薬物濃度の測定が可能であることが示された。

The aim of this study was to establish a quantitative method for intracellular free substance concentration in hepatocytes by means of membrane fusion and encapsulation of antibodies to these substances. The membrane fusion system was prepared by mixing the solvent with the solvent in a weight ratio of 4.8:1:2. The antibody solution was added to the solution and the mixture was stirred. The modulation of HVJ-Lip was carried out by UV irradiation, inactivation of HVJ-Lip (HVJ-Lip), addition of HVJ-Lip (HVJ-Lip) to HVJ-Lip (HVJ-Lip) at 4℃ for 30 minutes and 37℃ for 2 hours. Measurement of intracellular free protein concentration in liver cells by membrane fusion assay The radioactivity of the cells was measured after solubilization. Anti-virus antibody is introduced into liver cells. In addition, membrane fusion can be used to detect the presence of anti-virus antibody and anti-virus antibody in hepatocytes. The membrane fusion of the antibody is not encapsulated in the membrane fusion system. The above results show that the concentration of free substances in cells can be determined by membrane fusion.