高効率物質生産システムとしての浮遊-付着可変型動物細胞培養系の開発

开发浮动贴壁可变动物细胞培养系统作为高效物质生产系统

• 批准号: 09876023
• 负责人: 人見 清隆
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09876023/
• 关键词: 筋芽細胞; カルパスタチン; カルパイン; 付着性細胞

本年度は最終年度であり、以下の通り研究を総括する。動物細胞を用いた物質生産、機能解析を行う上で、付着細胞を何らかの制御機構の下で浮遊化して培養することができれば、非常に多彩な実験系が成立する。本研究はそのような細胞培養系の確立を最終目的として、細胞接着タンパクの切断や付着性に関与する細胞内プロテアーゼ、カルパインの発現制御を行ってそのような細胞株が作成できるか検討したものである。すなわち、カルパインとその特異的阻害タンパク質カルパスタチンについて、一方を誘導的に発現させるなど、本来厳密にレベルが制御される両タンパクの割合を変えて、接着関連タンパクの急激な変化、ひいてはその付着性の変化を検討しようとした。細胞としては、筋芽細胞C2C12、および線維芽細胞NIH3T3,L929を用いた。本研究では初年度にまず、カルパイン、カルパスタチンの安定発現株の取得を試み、カルパスタチンについてのみ成功した。カルパインについては、最終年度まで取得ができなかった。カルパスタチンについては、NIH3T3については付着性に変化が生じ、カルパイン活性の相対的な低下も見られた。逆にカルパスタチン発現量を抑制させて、カルパイン活性の相対的な上昇→付着性の現象を試みているが、抑制株の取得を現在行っている段階である。カルパスタチン、カルパインの安定、誘導発現株の取得は他の遺伝子群に比べて明らかに困難で、これは細胞に致死的効果があったためではないかと考えられる。

This year is the last year of the year, and the following general research is included. Animal cells are used for substance production, functional analysis, and cell culture. The ultimate goal of this study is to establish a cell culture system and to establish a cell culture system that is capable of producing cells and cells that are capable of producing cells. In addition, the special resistance of each party, the occurrence of one party's induction, the original secret, the control of the other party's separation, and the subsequent correlation between the urgent change of the party's resistance and the change of the party's adhesion are discussed. Cell types: C2C12, NIH 3T3,L929. This study was conducted in the first half of 2001 to determine the success of the research on the stability of the plant.カルパインについては、最终年度まで取得ができなかった。NIH 3T3 is the first time that the activity of a drug has been reduced. In the middle of the process, the inhibition of the production of the reverse strain, the increase of the activity of the reverse strain, the decrease of the activity of the reverse strain, the increase of the activity of the reverse strain, the decrease of the increase of the It is difficult to obtain other genetic subgroups, and it is difficult to obtain lethal effects.

项目成果

K.Hitomi: "Constant Expression of Mouse calpastatin isoforms during differentiation in myoblast cell line,C2C12"Cytotechnology. (印刷中). (2000)

K.Hitomi：“成肌细胞系分化过程中小鼠钙抑素亚型的恒定表达，C2C12”《细胞技术》（出版中）。

Takahashi et al.: "Regulation of matrix metalloproteinase-9 and inhibition of tumor invasior by the membrane-anchoed gycoprotein RECK" Proceedings of the National Academy of Science.USA.95. 13221-13226 (1998)

Takahashi 等人：“膜锚定糖蛋白 RECK 调节基质金属蛋白酶 9 和抑制肿瘤侵袭”美国国家科学院院刊 95。

J.Takano: "Structure of mouse calpastatin isoforms:Implication of species-common and species-specific alternative splicing"Biochemical Biophysical Research Communications. 260. 339-345 (1999)

J.Takano：“小鼠钙蛋白酶同种型的结构：物种常见和物种特异性选择性剪接的含义”生物化学生物物理研究通讯。

Edy M.Vilei, et.al.: "Functional properties of recombinant calpain I and of mutants lacking domains and of the cafalytic subunit" Journal of Biological Chemistry. 272,(41). 25802-25906 (1997)

Edy M.Vilei 等人：“重组钙蛋白酶 I 和缺乏结构域的突变体以及 cafalytic 亚基的功能特性”《生物化学杂志》。