広範囲の患者に有効な低アレルゲン化米の開発

开发对广泛患者有效的低过敏性大米

• 批准号: 08760132
• 负责人: 安達 貴弘
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760132/
• 关键词: イネ; アレルゲン; 種子貯蔵タンパク質; アルブミン; グロブリン

コメに含まれている未同定のアレルギー原因タンパク質を検索し、それらタンパク質の特性を明らかにすることを目的とした。そのためにまず、コメより塩水溶液可溶性画分のタンパク質を調製し、OEAEイオン交換カラムクロマトグラフィーにより分離し、これらタンパク質のSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動解析を行った。この結果を以前に得られている患者血清を用いてのウェスタンブロット解析の結果と照らし合わせ、患者血清と反応すると思われる33kDaおよび21kDaのタンパク質の精製を試みた。ゲル濾過法およびイオン交換カラムを用いた高速液体クロマトグラフィーによりさらに精製した。精製されたタンパク質のN末端側のアミノ酸配列決定を行ったところ、21kDaタンパク質は小麦のα-アミラーゼ・トリプシンインヒビターと相同生が高いことが判明した。しかし、このα-アミラーゼ・トリプシンインヒビターはRAが属するものとは異なっていた33kDaタンパク質はトリプシンにより部分分解後、ペプチド配列を決定した。ここで得られた部分アミノ酸配列と相同性を示すものはデータベースにには存在せず、新規のものであることが示唆された。また、アレルギー原因タンパク質である26kDaのα-グロブリンのゲノム遺伝子のクローン化を行い、発現調節機構を明らかにすることを目的とした。約40万のイネゲノム遺伝子ライブラリーをα-グロブリンcDNAをプローブとしてスクリーニングしたところ,2つの陽性クローンを得た。これらクローンに含まれているイネDNAの制限酵素地図を作成後、サブクローン化を行い、塩基配列を決定した。α-グロブリン遺伝子はアレルゲンとして以前に我々が同定している14-16kDaアルブミン(RA)遺伝子と同様にイントロンを含まず、比較的小さい遺伝子であった。

The reason for the change in the quality of the product is unknown. The quality of the product is unknown. Water Solubility Analysis of Water Solubility These results were obtained from the analysis of serum samples from patients who had previously been treated with a 33kDa or 21kDa protein. The filter method is used for high-speed liquid purification. The N-terminal side of the purified protein was determined to be the same as the α-terminal side of the purified protein. After partial resolution of the 33kDa protein, the protein sequence was determined. This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with someone else. The reason for this is that 26kDa α-glucuronidase is involved in the development of the regulatory mechanism. About 400,000 copies of the cDNA were obtained. After the preparation of the restriction enzyme site for the production of DNA, the sequence of the restriction enzyme was determined.α-glucuronidase (RA) is a protein that has been identified as a 14-16kDa protein in the past and is contained in the same protein in the past.

项目成果

Adachi,T.: "Cloning of rice seed a-globulin-encoding gene : sequence similarity of the 5′-flanking region ot those of wheat high-molecular-weight glutenin and barley D hordein." Gene. 170. 223-226 (1996)

Adachi, T.：“水稻种子 α-球蛋白编码基因的克隆：小麦高分子量麦谷蛋白和大麦 D 大麦醇蛋白 5 侧翼区域的序列相似性。170。223-226（基因）。” 1996）