权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

クライオ電子顕微鏡を用いたヘテロクロマチン基盤構造の解明

使用冷冻电子显微镜阐明异染色质的基本结构

基本信息

批准号：
22KJ0575
负责人：
何承翰
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

真核生物のゲノムDNAは、ヌクレオソームを基本単位とするクロマチンを形成し、核内に収納されている。クロマチンは、弛緩しているユークロマチンと凝縮しているヘテロクロマチンに分けられている。本研究はHP1やH3K9me3、リンカーヒストンH1により形成される、ヘテロクロマチンの基盤構造解明を目的とする。昨年度までは、DNAやタンパク質の精製を行い、HP1-H1-ジヌクレオソーム複合体の精製を行った。さらに、クライオ電子顕微鏡の解析により、HP1-H1-ジヌクレオソームの複合体の密度マップが得られた。密度マップからジヌクレオソームとH1は観察された一方、HP1に相当する密度は観察できなかった。おそらく複合体の安定性が十分ではなく、グリッド作製の過程で複合体が壊れたと考えられる。そこで、複合体の安定性を向上させるため、本年度は、ジヌクレオソームのリンカーDNAの長さや、HP1結合タンパク質の追加などについて検討した。その結果、HP1結合因子を含む、HP1-H1-ジヌクレオソーム4者複合体の精製に成功した。次に、4者複合体を用いてグリッドを作製し、効率よくスクリーニングを行なった。電顕画像から、昨年度のHP1-H1-ジヌクレオソーム複合体よりも大きい粒子が観察できたことから、グリッド作製の途中でHP1結合因子を含む、4者複合体は壊れていないと思われた。最後に、粒子の分布が良かったため、クオリティの高いグリッドでデータコレクションを行なった。現在は取得した約1万8千枚の画像を用い、単粒子解析を行っている。

Eukaryotic organisms need DNA to be able to form and store DNA in the nucleus.クロマチンは、弛缓しているユークロマチンと凝缩しているヘテロクロマチンに分けられている。The purpose of this study is to clarify the structure of HP1, H3, K9, H1 and H2. In the past year, the purification of DNA and HP1-H1-DNA complex was carried out. The density of the HP1-H1 complex was determined by electron microscope analysis. The density of H1 and HP1 is equivalent to the density of H1 and HP1. The stability of the complex is very high. The complex is very stable. This year, the stability of the complex has been improved, and the growth of DNA and the addition of HP1 binding protein have been investigated. The results showed that HP1 binding factor was contained in the complex, and HP1-H1-H2 complex was successfully purified. The four complex elements are used to control and improve the efficiency of the system. The HP1-H1-H1-H2 complex of the current year contains the HP1 binding factor, and the HP1-H2 complex of the current year contains the HP1 binding factor, and the HP1 binding factor of the current year contains the HP1 binding factor. Finally, the distribution of particles is very good. About 18,000 images have been obtained, and particle analysis has been carried out.