CENP-Aクロマチンリモデリング機構の解明

阐明CENP-A染色质重塑机制

基本信息

  • 批准号:
    17050010
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 3.9万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    2005
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2005 至 2006
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究計画は、我々研究グループのこれまでの研究成果から、ヒト培養細胞間期核内より、セントロメアクロマチン(CENP-Aクロマチン)複合体=ICENを単離精製し、40種類のICEN構成蛋白を明らかにした所から出発している(Obuse et al, Genes Cells,9,105-120,2004)。40種類のICEN蛋白の中から、機能未知の蛋白7種類について、遺伝子の全長をクローニングし、EGFP遺伝子との融合遺伝子を作成し、ヒト細胞に導入し、安定トランスフォーマント株を作成した。7種類のICEN蛋白(ICEN22,24,32,33,36,37,39)が細胞周期を通して、セントロメアに局在する事を明らかにした。さらに、7種類それぞれのICEN蛋白をsiRNAによりノックダウンすることにより、染色体分配に異常が生じ、高頻度に染色体異数体が生じる事を示した。以上の結果から、7種類のICEN蛋白が染色体分配に係る新規セントロメア蛋白である事を明らかにした(Izuta et al, Gene Cells,11,673-684,2006)。次に我々は、CENP-Aクロマチン形成機構を明らかにする目的で、ICEN構成因子であるRsf1-hSNF2H(ICEN2-ICEN8,RSF)リモデリング複合体に着目し、研究を進め以下の成果を得た。1.Rsf1(ICEN2),hSNF2H(ICEN8)に対するモノクローナル抗体の作成。細胞染色、ウェスタンブロッティング、クロマチン免疫沈降に使用可能である。特に抗hSNF2H抗体はクロマチン免疫沈降にすぐれた特異性を示し、特にnative-クロマチンの単離精製にすぐれている。2.(i)Rsf1及びhSNF2Hが間期にセントロメア局在する。(ii)siRNAによるRsf1除去により核内におけるCENP-Aの量が顕著に減少し、prometa期からmeta期への進行が顕著に遅滞する。(iii)siRNA除去により、EGFP-CENP-Aのセントロメア局在が阻害される。(iv)in vitro再構成系により精製RSF複合体はCENP-Aヌクレオソーム形成活性及びスペーシング活性を有する。以上の結果から、我々はICEN構成因子に含まれる唯一のヌクレオソームリモデリング因子であるRSF複合体が、CENP-Aクロマチン形成因子であると結論した。(論文投稿中)
This research project is based on the results of our previous research on the development of CENP-A complex (ICEN) in cultured interphase nuclei (Obuse et al, Genes Cells,9,105- 120, 2004). 40 kinds of ICEN protein in the middle, function unknown protein 7 kinds of protein, gene length, EGFP gene fusion gene production, cell introduction, stable gene production 7 kinds of ICEN proteins (ICEN22,24,32,33,36,37,39) are important for the cell cycle. 7 kinds of ICEN protein siRNAs were detected, and chromosome distribution was abnormal. The results showed that 7 kinds of ICEN proteins were assigned to chromosomes according to new rules (Izuta et al, Gene Cells,11,673- 684, 2006). Secondly, we have achieved the following results for the purpose of clearly defining the CENP-A Kouromacon formation mechanism and the ICEN component Rsf1-hSNF2H (ICEN2-ICEN8,RSF) complex. 1. Rsf1 (ICEN2), hSNF2H (ICEN8) for the preparation of antibodies. Cell staining, Specific anti-hSNF2H antibodies are characterized by specific immunoprecipitation, specific native-immunoprecipitation and purification. 2. (i) Rsf1 and hSNF2 are separated from each other. (ii)siRNA Rsf1 removal reduces the amount of CENP-A in the nucleus, and the prometa phase continues to slow down. (iii)siRNA removal, EGFP-CENP-A gene transfer, and inhibition. (iv)In vitro reconstitution system, purified RSF complexes have both CENP-A complex formation activity and protein synthesis activity. The above results show that ICEN component factors include the RSF complex and CENP-A component factors. (Paper submission in progress)

项目成果

期刊论文数量(7)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Coprehensive analysis of the ICEN(Interphase Centromere Complex) components enrichied in the CENP-A chromatin of human cells
人体细胞CENP-A染色质中富集的ICEN(间期着丝粒复合体)成分的综合分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Izuta H;Ikeno M;Suzuki N;Yoda K.
  • 通讯作者:
    Yoda K.
Human CENP-B induces translational positioning of nucleosomes on alpha-satellite sequences.
人类 CENP-B 诱导核小体在 α 卫星序列上的翻译定位。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Tanaka Y;Tachiwana H;Yoda K;et al.
  • 通讯作者:
    et al.
Centromere protein H is up-regulated in primary human colorectal cancer ant its overexpression induces aneuploidy.
着丝粒蛋白 H 在原发性人类结直肠癌中表达上调,其过度表达会诱导非整倍性。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Tomonaga T;Yoda K;Nomura F
  • 通讯作者:
    Nomura F
Centromere function and chromosome instability
着丝粒功能和染色体不稳定性
セントロメアクロマチンの構造と機能:CENP-Aがセントロメア領域を決定する
着丝粒染色质的结构和功能:CENP-A决定着丝粒区域
  • DOI:
  • 发表时间:
    2005
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Kawano;S.(Collaboration);Koichi Inoue et al.;依田欣哉
  • 通讯作者:
    依田欣哉
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CENP-Aクロマチンダイナミクスと核内機能解析
CENP-A染色质动力学和核功能分析
  • 批准号:
    07F07150
  • 财政年份:
    2007
  • 资助金额:
    $ 3.9万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
ヒトCENP-Aクロマチンダイナミクス
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  • 批准号:
    19038012
  • 财政年份:
    2007
  • 资助金额:
    $ 3.9万
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  • 批准号:
    10159208
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    1998
  • 资助金额:
    $ 3.9万
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  • 批准号:
    09266208
  • 财政年份:
    1997
  • 资助金额:
    $ 3.9万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
ヒトセントロメア領域特異的ヌクレオソーム構造が形成する高次構造体の解析
人类着丝粒区域特异性核小体结构形成的高阶结构分析
  • 批准号:
    09263206
  • 财政年份:
    1997
  • 资助金额:
    $ 3.9万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
ヒトセントロメア蛋白質CENP-Aの機能解析
人着丝粒蛋白CENP-A的功能分析
  • 批准号:
    08277213
  • 财政年份:
    1996
  • 资助金额:
    $ 3.9万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
ヒト染色体セントロメア(αサテライトDNA)領域における高次ヌクレオソーム構造
人类染色体着丝粒(α-卫星 DNA)区域的高阶核小体结构
  • 批准号:
    08274207
  • 财政年份:
    1996
  • 资助金额:
    $ 3.9万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
ヒト染色体セントロメア領域で形成されるヌクレオソーム構造のポジショニング
人类染色体着丝粒区域形成的核小体结构的定位
  • 批准号:
    06680681
  • 财政年份:
    1994
  • 资助金额:
    $ 3.9万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
ヒト染色体セントロメア領域を構成するDNAと蛋白質の相互作用
DNA 和构成人类染色体着丝粒区域的蛋白质之间的相互作用
  • 批准号:
    05680607
  • 财政年份:
    1993
  • 资助金额:
    $ 3.9万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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