Weelファミリータンパク質リン酸化酵素の機能ドメイン構造の解析

Weel家族蛋白激酶功能域结构分析

• 批准号: 08680777
• 负责人: 渡邉 信元
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680777/
• 关键词: 細胞関期; Weel; タンパク質リン酸化酵素; サイクリン; Cdc2

本研究では,線虫より単離された2つの新しいWeel様タンパク質をコードすると考えられるcDNAについて解析を行い,以下の新しい知見を得た.<線虫weel様cDNAの単離・配列決定>DNAデータベースの情報を元に,線虫より2種のWeel様タンパク質をコードすると考えられるcDNAを単離し,全塩基配列を決定した.他の生物のWeelとの比較を行ったところ,タンパク質リン酸化酵素活性部位では,Weelファミリータンパク質リン酸化酵素に特異的に保存されているアミノ酸が全て保存されていた.片方のクローン(クローン8)は活性部位のC末に膜結合領域と考えられる部位が存在し,Weelファミリーに属するT14/Y15キナーゼMyt1のホモログであると考えられるものであった.他方のクローン(クローン6)は膜結合領域と考えられる領域は存在しないものの,活性部位が比較的N末に存在することなどこれまでに知られるWeelファミリーキナーゼとは異なる構造を取っていることが予想された.<Weel様タンパク質の活性の解析>これらのcDNAをバキュロウイルスの系で発現させ,サイクリンB・Cdc2を基質とするタンパク質リン酸化反応で活性を解析した.Myt1のホモログと考えられたクローン8には,実際Cdc2のT14,Y15をリン酸化する活性が確認できた.クローン6はT14のみをリン酸化する活性が検出され,これまで知られていない新しいタイプのWeelファミリーキナーゼであることが明らかになった.<Weel様タンパク質の基質決定部位の解析>クローン6と8の活性部位の比較を行い,基質特異性に関与すると考えられる部位の予測を行った.現在その予測を実証する実験が進行中である.

In this study, two new insights were obtained from the cDNA analysis. <DNA sequence determination> cDNA sequence information element, cDNA sequence determination, cDNA sequence determination. The comparison of the biological properties of the enzyme is carried out in the following ways: the active site of the enzyme, the specific preservation of the enzyme, the complete preservation of the enzyme. T14/Y15-Myt1-Myt1-Myt1 Myt1-Myt1-Myt1 Myt1-Myt1 Myt1 The other side of the film is bound to the field, and the active site is compared to the N terminal. The structure of the film is different. <Analysis of Weel Protein Activity> The cDNA sequence of this protein was detected, and the enzyme activity of this protein was analyzed. Myt1 cDNA sequence was detected, and the enzyme activity of Cdc2 T14,Y15 was confirmed. The activity of T14 was detected and the activity of T14 was detected. Analysis of matrix-determining sites of Weel protein> Comparison of active sites of 6 and 8, prediction of matrix-specific sites and studies. Now the forecast is in progress.