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エイズウイルス感染に伴う細胞周期停止機構の解析と、感染症防止への応用

艾滋病病毒感染相关细胞周期阻滞机制分析及其在传染病预防中的应用

基本信息

批准号：
11878143
负责人：
渡邉信元
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11878143/
关键词：
細胞周期エイズウイルス Vpr Cdc2 G2期停止

项目摘要

種々のエイズウイルス株のコードするVprのG2期停止活性の解析種々のエイズウイルス株のコードするVprを細胞内で発現させそのG2期停止活性,細胞増殖停止活性を比較した.これらの活性はそれぞれ独立に決定されているようであり,特に前者にはVprのC末端のアミノ酸配列が影響している事が明らかになった.出芽酵母系での,Vprによる増殖停止を解除するヒト遺伝子の大規模なスクリーニング誘導剤の添加によりVprの発現を誘導することで,細胞増殖をほぼ完全に停止できる出芽酵母の系を確立した.この系に,さらに酵母発現ベクターに組み込んだヒトcDNAライブラリーを導入し,Vprの発現誘導後もコロニーを形成するクローンの選択を行なった.このようなクローンにはVprの細胞周期停止作用の作用点となる遺伝子産物が発現している可能性が考えられたが,このようなクローンの単離には至らなかった.Vprの作用を阻害するためには一つの遺伝子の過剰発現だけでは不十分であるという可能性が示唆された.G2期停止に関与する細胞内因子の解析DNA損傷などによるG2期停止の際にCdc2キナーゼを不活性化する機構の解析を行った.Myt1がCdc2をリン酸化し活性阻害するのみならず,Cdc2キナーゼに結合しM期開始時における核移行を阻害する事を見出した.また,Chk1キナーゼの単離を行い,細胞周期中での活性の変動を解析し,DNA損傷では活性に大きな変化は無いが,DNA複製阻害の刺激により活性化する事を見出した.

Kind of 々のエイズウイルス strains of のコードするVprのG2 phase stopped active analysis kind of 々のエイズウイルス strain のコードするVprをThe intracellular activity has stopped in the G2 phase and cell proliferation has stopped. Compare した.これらのactiveはそれぞれINDEPENDENT にdeterminationされているようであり,特に formerにはVp rのC terminal のアミノacid arrangement がeffect している事が明らかになった.Budding yeast system での,Vpr Stop the reproduction of するヒト伝子のlarge-scale なスクリーニング induction 剤のadd によりV prの発appears to be induced and cell proliferation is completely stopped and the line of budding yeast is established. .この线に,さらにYeast発appearベクターに集团み込んだヒトcDNAライブラリーをImportし, Vprの発appears to induce the formation of するクローンの选を行なった.このようなクローThe point of action of ンにはVprのcell cycle arrest action and the possibility of the remaining sub-products are consideredえられたが,このようなクローの単里には to らなかった. G2 period is suspended. Analysis of stop and stop intracellular factors DNA damage stop G2 phase stop Cdc2 stopをInactivation Mechanism Analysis の行った.Myt1がCdc2 をリンAcidification しActivity Blocking するのみならず,Cdc2キナーゼに合しWhen the M period begins, におけるnuclear migration is hindered and する事を见出した.また, Chk1 キナーゼの単里を行い, でのactivity の変动をanalytic し in the cell cycle, DNA damageではActivityに大きな変化は无いが,DNA replication-blocking stimulationによりactivationする事を见出した.