運動による老化細胞除去機構の解明ー慢性呼吸器疾患治療モデルへの展開

当該年度は、マウス胚性線維芽細胞（MEF）の分裂寿命を、C2C12細胞培養上清（CM）に含まれる因子が延伸することを見出した。またC2C12 CMに曝露したMEFでは、SA-βGal、Cdkn2a遺伝子など複数の細胞老化マーカーの活性・発現に低下が見られたことから、CM中には細胞老化を抑制する因子が含まれることが示唆された。質量分析によりC2C12細胞培養上清に含まれる因子を解析し、運動によって血中濃度が増加する因子に関する先行研究のデータと照らし合わせ、一つの候補因子を得た。この因子に対する中和抗体存在下では、C2C12 CMによるMEF細胞老化抑制作用に減弱が認められた。さらに、精製した同因子を培地中に添加することにより、細胞老化マーカーの発現低下と増殖の亢進が観察された。これらの実験結果から示されたC2C12から分泌される細胞老化抑制因子をセノサプレッサー（seno-suppressor）と分類した。生体内におけるセノサプレッサー動態と生理作用について解析を行うために、当該年度はマウス運動モデルの樹立を行った。マウス運動モデルを用いた多くの先行研究において、末梢組織の細胞老化に対する影響について一貫性が見られないが、自発的運動モデルにおいてはほぼすべての先行研究で末梢組織の細胞老化が低下する傾向が見られていることから、本研究でも自発的運動モデルを樹立して解析することにした。分担研究者（至学館大学）において回転ホイール付きケージを作製し、自発的運動モデルの樹立を開始し、1日当たり2~5 kmの走行を自発的に行うモデルを樹立した。

当該年度は、マウス胚性線維芽細胞（MEF）の分裂寿命を、C2C12細胞培養上清（CM）に含まれる因子が延伸することを見出した。またC2C12 CMに曝露したMEFでは、SA-βGal、Cdkn2a遺伝子など複数の細胞老化マーカーの活性・発現に低下が見られたことから、CM中には細胞老化を抑制する因子が含まれることが示唆された。質量分析によりC2C12細胞培養上清に含まれる因子を解析し、運動によって血中濃度が増加する因子に関する先行研究のデータと照らし合わせ、一つの候補因子を得た。この因子に対する中和抗体存在下では、C2C12 CMによるMEF細胞老化抑制作用に減弱が認められた。さらに、精製した同因子を培地中に添加することにより、細胞老化マーカーの発現低下と増殖の亢進が観察された。これらの実験結果から示されたC2C12から分泌される細胞老化抑制因子をセノサプレッサー（seno-suppressor）と分類した。生体内におけるセノサプレッサー動態と生理作用について解析を行うために、当該年度はマウス運動モデルの樹立を行った。マウス運動モデルを用いた多くの先行研究において、末梢組織の細胞老化に対する影響について一貫性が見られないが、自発的運動モデルにおいてはほぼすべての先行研究で末梢組織の細胞老化が低下する傾向が見られていることから、本研究でも自発的運動モデルを樹立して解析することにした。分担研究者（至学館大学）において回転ホイール付きケージを作製し、自発的運動モデルの樹立を開始し、1日当たり2~5 kmの走行を自発的に行うモデルを樹立した。