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アルボウイルスの特殊なゲノムRNA構造の解析と媒介性の規定要因としての検証

虫媒病毒独特的基因组RNA结构分析及其作为中间性决定因素的验证

基本信息

批准号：
22K19185
负责人：
大手学
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

我々が発見したプラス鎖RNAウイルスに誘導される特殊なRNA構造について、その詳細を明らかにすることを目的とした。この構造を認識する抗体を用いた細胞染色により、デングウイルスの複製サイトに局在するRNAがこの構造を形成することがわかった。また、昆虫ウイルスの変異解析を行うために、FHVのTrans-replication systemを開発した。ウイルスゲノムと複製酵素をそれぞれプラスミドにクローニングし、培養細胞に導入したところ、複製が確認された。特に、プラスミド導入後2日に転写阻害剤を添加すると、複製がより活発になることがわかった。また、ウイルスの複製に必要な約250塩基のゲノムRNA領域を特定し、変異解析を行った。ゲノム配列の情報解析により、分子内構造を形成することが予想された配列に変異を導入したところ、影響がみられなかった。そこで、網羅的な変異解析を行ったところ、複数のウイルスRNA分子が相互作用している可能性が示された。このシステムでは任意の配列を導入することができることができる。そこで、担体結合性アプタマーを挿入することにより、細胞内よりウイルスRNAを高純度で生成する手法を開発した。これにより、ウイルスRNAを1-2万倍濃縮することができた。この手法によって精製したウイルスRNAを用いてin vitro解析を行ったところ、RdRPにより、ウイルスRNA自体の性質が変化していることが判明した。

We found out that the RNA gene was induced by a specific RNA gene, and the specific RNA gene was induced by a specific gene. The structure of the antibody is recognized by cell staining and replication. The development of FHV's Trans-replication system It is necessary to introduce the replicative enzyme into the culture medium and confirm its replication. 2 days after the import of the special file, add a copy of the file to the active file. About 250 base pairs of RNA are required for replication. The structure of the molecule is different from the structure of the molecule. The possibility of RNA molecules interacting with each other is shown by the analysis of different molecules in the network. This is the first time I've ever seen a woman. A method for producing high purity RNA in cells was developed. The RNA is 1- 20,000 times more concentrated. This technique is used to refine the RNA in vitro analysis and to identify the properties of the RNA itself.