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抗腫瘍活性物質アプリロニンAの作用機序に関する研究

抗肿瘤活性物质aprironin A作用机制研究

基本信息

批准号：
13J01175
负责人：
平山裕一郎
金额：
$ 1.32万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013 至 2014
项目状态：
已结题

项目摘要

アプリロニンA(ApA)は強力な抗腫瘍活性を有する海洋産マクロライドである。標的タンパク質としてアクチンに作用することが知られていたが、アクチンとの作用のみではApAの強力な抗腫瘍活性を説明できず、その作用機序は不明であった。これまでに申請者はApAの作用機序の解明を目的に、ApAをリガンドとした光親和性ビオチンプローブを合成し、これを用いて新規標的タンパク質としてチューブリンの同定に成功している。さらにApAがアクチン存在下でチューブリン重合阻害活性を示すことを見出していた。前年度に精製チューブリンを用いたin vitroでの相互作用解析を進め、ApAとチューブリンの相互作用にアクチンが必要であることを明らかにした。この結果からApAがアクチンとチューブリンの両者と結合し三元複合体を形成していることが強く示唆された。そこで今年度はこの三元複合体の結合様式を明らかにするために、ゲルろ過HPLCによる三元複合体の精製とその結合様式の解析、およびビアコアを用いたSPRによる三元複合体相互作用の解析を行った。結果、ApAがアクチンモノマーおよびチューブリンヘテロダイマーと1:1:1の複合体を形成していることを明らかにし、この複合体の結合能が十分に強いことを明らかにした。アクチンやチューブリンに結合する化合物は多く知られているが、アプリロニンAのように両者に同時に結合して強力な活性を示すことはこれまで報告例がなく、ApAが興味深い作用機序を有する天然物であることがわかった。

ApA has strong anti-tumor activity and is produced in the ocean as a マクロライドである. The target material is タンパク性としてアクチンにeffect することが知られていたが、アクチンとの作The strong anti-tumor activity of ApA is used to explain the mechanism of action of ApA. The mechanism of action of ApA is unknown.これまでにApplicantはApA's mechanism of action and explanation of its purposeに、ApAをリガンドとしたPhotoaffinity test The プローブをsynthetic し, これをいて new standard タンパクquality としてチューブリンの同定に successfully している. In the presence of the さらにApA がアクチン, the でチューブリン coincidence blocks the activity of the すことを见出していた. The refined チューブリンをいたin from the previous year Analysis of in vitro interactions is necessary, and ApA interactions are necessary.このRESULTS からApAがアクチンとチューブリンの両者とcombinationしternary complexをformationしていることが强く Show唆された.そこでThis year's ternary complex combination type を明らかにするために、ゲルろHPLC ternary complex のAnalysis of refined combination and ternary complex interaction using SPR. As a result, ApA がアクチンモノマーおよびチューブリンヘテロダイマーと 1:1:1 complex The binding energy of the complex formed is very strong and strong.アクチンやチューブリンに Combined compound は多く知られているが、アプリロニンAのように両者に simultaneousにcombinationしてPowerful active ingredients are shown in the report example, ApA is interesting and deep in action, and the mechanism of action is natural ingredients.