PROBING THE CELL-SPECIFIC CONTROL OF FOCAL CORTICAL SEIZURE EVENTS IN VIVO

癫痫是一种常见的严重的神经系统疾病，1年患病率约为7/1，000， 机制知之甚少。 它在退伍军人中的流行率很高。 脑外伤后患者 损伤在损伤后数十年内具有癫痫高风险，导致相当高的发病率。 15年时 在受伤后，越南头部损伤研究中51%的受试者被诊断为癫痫发作。 明确 癫痫是VA人群的一个重要问题。 获得性创伤常导致局灶性失衡 在兴奋和抑制之间，这会驱使正常的神经回路进入自我维持的状态。 振荡活动状态表现为皮层表面EEG上的癫痫发作。 这一现象显然证明， 研究，因为它与表现为局灶性癫痫发作的多种神经系统疾病（包括慢性局灶性癫痫发作）相同 癫痫，这是创伤后癫痫最常见的形式。 具体来说，我们需要了解 个体神经元被招募到体内的发作事件中，招募的顺序是什么， 募集随时间的变化导致发作活动的开始和抵消，募集如何取决于 兴奋性神经元与特定类别的抑制性中间神经元之间的相互作用，以及是否招募 沿着某些电路路径比沿着其它电路路径更有效地沿着。 我们将联合收割机大规模体内2-光子显微镜技术与特异性光遗传学调节相结合， 选择的细胞类型和单个单位膜片钳记录，以研究局灶性 在局灶性癫痫发作的4-氨基吡啶（4-NHAP）小鼠模型中引发癫痫发作。 我们建议研究和 比较视觉和运动皮层，这两个区域具有不同的致敏潜力。 4-BMAP模型是一个 一个可靠的，建立良好的，局灶性新皮层癫痫发作诱导脑电图（EEG）事件的模型 类似于在患有局灶性创伤后癫痫的人类患者中观察到的低电压快速癫痫发作事件。 与其他化疗惊厥药相比，GABA-β能传递相对保留，使4-β AP成为理想的 一个模型，用于研究正常的抑制回路如何无法控制由神经元驱动的异常事件的传播。 过度兴奋被认为发生在外伤后癫痫。 在目标#1中，我们将测量单个神经元到神经元分化进展阶段的募集概况。 在4-ADP注射后通过EEG观察到的局灶性新皮质癫痫发作事件，并将确定如何招募 取决于细胞类型和沿着皮层回路的沿着位置。 GABA能中间神经元的3个主要类别 (PV+、SOM+、VIP+）将在体内进行监测，并在层中表征它们对癫痫发作事件的募集 2/3、4和5，在V1区（4-AP注射部位）以及V2区和对侧皮质中。 我们 预期皮层神经元在发作间期、发作前、发作期和发作后受到不同的调制 阶段。 癫痫样活动演变过程中不同类型神经元的募集特征 发作间期到发作期将提供关于这些神经元在癫痫发作进展中所起作用的信息。 以识别 电路故障的普遍主题，我们将比较4-氨基酚AP的毛果芸香碱模型的局灶性癫痫发作。 在目标#2中，我们将使用光遗传学方法来询问不同的中间神经元类型的因果作用， 局灶性癫痫样活动从发作间期到发作的演变，并测试如何停止癫痫发作。 我们预计 不同的中间神经元类别对局部皮层回路的夹带做出了不同的贡献， 致癫痫活动 这可能取决于皮质层。 中间神经元参与差异在 癫痫发作进展的各个阶段将是控制发作活动的主要目标。 了解单个神经元如何被招募到局灶性癫痫的癫痫发作事件中，以及它们如何 影响癫痫发作将成为未来发展新的、基于电路的治疗策略的基础 针对特定的细胞类别。 这代表了与当前药理学互补的范式转变 接近。

Epilepsy  is  a  common  severe  neurological  disorder  with  one-­year  prevalence  ~7/1,000,  whose  circuit  mechanisms  are  poorly  understood.  Its  prevalence  is  high  among  veterans.  Patients  with  post-­traumatic  brain  injury  carry  a  high  risk  of  epilepsy  for  decades  following  injury,  causing  considerable  morbidity.  At  15  years  following  injury  51%  of  the  subjects  in  the  Vietnam  Head  Injury  Study  carried  a  diagnosis  of  seizure.  Clearly  epilepsy  is  an  important  problem  for  the  VA  population.  Acquired  trauma  often  leads  to  focal  imbalance  between  excitation  and  inhibition,  which  drives  otherwise  normal  neural  circuits  into  self-­perpetuating  oscillatory  activity  states  manifesting  as  seizures  on  cortical  surface  EEG.  This  phenomenon  clearly  warrants  study  as  it  is  shared  by  multiple  neurological  disorders  presenting  with  focal  seizures,  including  chronic  focal  epilepsy,  which  is  the  most  common form  of post-­traumatic  epilepsy.  Specifically,  we need to understand  how  individual neurons get recruited into ictal events in vivo, what is the sequence of recruitment, how properties of  recruitment  change  with  time  leading  to  the  onset  and  offset  of  ictal  activity,  how  recruitment  depends  on  the  interaction between excitatory neurons with specific classes of inhibitory interneurons, and whether recruitment  proceeds more efficiently along certain circuit pathways more than others.   We  will  combine  large  scale  in  vivo  2-­photon  microscopy  techniques  with specific  optogenetic  modulation  of  selected  cell  types  and  individual  unit  patch-­clamp  recordings  to  study  the emergence  and  spread  of  focally  initiated  seizures  in  the  4-­aminopyridine  (4-­AP)  mouse  model  of  focal  ictogenesis.  We  propose  to  study  and  compare  visual  and  motor  cortex,  two  areas  with  different  potential  for  ictogenicity.  The  4-­AP  model  is  a  reliable,  well-­established,  model  of  focal  neocortical  seizures  inducing  electroencephalographic  (EEG)  events  similar  to  the  low-­voltage  fast-­onset  events  observed  in  human  patients  with  focal  post-­traumatic  epilepsy.  Compared to other chemo-­convulsants, GABA-­ergic transmission is relatively preserved, making 4-­AP an ideal  model  for  studying  how  normal  inhibitory  circuits  fail  to  contain  the  spread  of  abnormal  events  driven  by  an  excess of excitation as has been argued to occur in post-­traumatic epilepsy.   In  Aim  #1,  we  will  measure  the  profile  of  recruitment  of  individual  neurons  to  the  phases  of  progression  of  focal  neocortical  seizure  events  observed  by  EEG  after  4-­AP  injection,  and  will  determine  how  recruitment  depends  on  cell  type  and  position  along  the  cortical  circuit.  The  3  major  classes  of  GABA-­ergic  interneurons  (PV+,  SOM+,  VIP+)  will  be  monitored  in  vivo  and  their  recruitment  to  seizure  events  characterized  in  layers  2/3,  4,  and  5,  in  area  V1  (the  site  of  4-­AP  injection)  as  well  as  in  area  V2  and  the  contralateral  cortex.  We  expect  cortical  neurons  to  be  differentially  modulated  during  the  interictal,  pre-­ictal,  ictal-­proper  and  post-­ictal  phases.  Recruitment  profiles  of  different  neuronal  types  during  the  evolution  of  epileptiform  activity  from  interictal  to  ictal  will  be  informative  about  the  role  these  neurons  play  in  seizure  progression.  To  identify   universal themes of circuit malfunction we will compare 4-­AP to the pilocarpine model of focal ictogenesis.     In  Aim  #2,  we  will  use  optogenetic  methods  to  interrogate  the  causal  role  of  different  interneuronal  types  in  the  evolution  of  focal  epileptiform  activity  from  interictal  to  ictal  and  test  how  to  stop  the  seizures.  We  expect  that  different  interneuron  classes  make  distinct  contributions  to  the  entrainment  of  local  cortical  circuits  by  ictogenic  activity.  This  will  likely  depend  on  cortical  layer.  Interneurons  that  engage  differentially  during  the  various phases of seizure progression will be prime targets for controlling ictal activity.   Understanding  how  individual  neurons  get  recruited  into  seizure  events  in  focal  epilepsy  and  how  they  influence ictogenesis will form the basis for the future development of new, circuit-­based, therapeutic strategies  targeting  specific  cell  classes.  This  represents  a  shift  of  paradigm  complementary  to  current  pharmacologic  approaches.