Développement d'un système recombinant de production de la chitosanase thermostable Csn (INNOV-phase 1)

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Une chitosanase thermostable a été découverte chez une souche bactérienne nouvellement isolée à partir d'un compost de crevettes, Paenibacillus sp. 1794. Cette enzyme (la Csn1794) permet de contrôler efficacement le poids moléculaire du chitosane, un polysaccharide cationique aux nombreuses applications potentielles dans les domaines biomédicaux, agricoles, environnementaux et cosmétiques. Mais la souche de Paenibacillus native nécessite un milieu de culture très coûteux afin de produire la chitosanase, surtout par le besoin d'ajouter des oligosaccharides de glucosamine comme inducteurs. Afin de rendre beaucoup moins coûteuse la production de la chitosanase Csn1794 il est proposé de développer un système recombinant en utilisant, comme hôte, des bactéries du groupe des actinomycètes. L'industrie biotechnologique est très familière avec les actinomycètes, car ils sont très utilisés en tant que producteurs d'antibiotiques. Le système sera basé sur des gènes synthétiques composés de trois cassettes conçues selon le principe modulaire: la cassette promotrice de la transcription; la cassette incluant les segments d'initiation de la traduction et le peptide signal et la cassette composée de la séquence codante pour la protéine et du segment terminateur de transcription. Le projet propose de contruire et de tester l'efficacité de 90 gènes modulaires, placés soit sur un vecteur plasmidique extrachromosomique soit sur un vecteur intégratif à localisation chromosomique et introduits dans deux souches hôtes différentes. Suite à l'identification de la meilleure combinaison gène/vecteur/hôte, le milieu de culture pour la production de la chitosanase Csn1794 sera optimisé par une approche basée sur un plan d'expériences.