Le système chitinolytique de Streptosporangium roseum: régulation transcriptionnelle et diversité enzymatique

玫瑰链孢子囊几丁质分解系统：转录调控和酶多样性

• 批准号: RGPIN-2014-05177
• 负责人: Brzezinski, Ryszard
• 金额: $ 3.86万
• 依托单位: Université de Sherbrooke
• 依托单位国家: 加拿大
• 项目类别: Discovery Grants Program - Individual
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 加拿大
• 起止时间: 2017-01-01 至 2018-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://www.nserc-crsng.gc.ca/ase-oro/Details-Detailles_eng.asp?id=629659
• 关键词: Le; syst; me; chitinolytique; de

L’intérêt des chercheurs et de l’industrie pour les oligosaccharides (CHOS) dérivés de la chitine et du chitosane (forme desacétylée de la chitine) est grandissant dû aux nombreuses perspectives d’application en médecine humaine et vétérinaire, en cosmétologie, en phytoprotection etc. Les CHOS peuvent être obtenus par hydrolyse enzymatique de la chitine, mais les enzymes nécessaires sont encore peu disponibles. Une recherche bioinformatique nous a orienté vers l'actinomycète Streptosporangium roseum, dont le génome possède de nombreux gènes codant pour des enzymes chitinolytiques: chitinases GH18 et GH19; chitosanases GH8 et GH46, enzymes de type "exo" des familles GH3 et GH9 et des mono-oxygenases de la chitine (famille AA10). La plupart de ces gènes sont précédés d'une séquence palindromique similaire à celle reconnue par le répresseur csnR de Streptomyces lividans, bien caractérisé par notre laboratoire. Ce mode de régulation possible distingue S. roseum des autres actinomycètes étudiés. Cependant S. roseum possède deux répresseurs très similaires à CsnR. Il est proposé de caractériser ces deux répresseurs en purifiant les protéines respectives et en déterminant (par mesure des constantes d'affinité) leurs préférences aux diverses séquences opératrices présentes en amont des gènes chitinolytiques. Des mutants avec un ou deux represseurs délétés seront générés. Ces mutants seront étudiés par transcriptomique (Q-PCR) ainsi que par protéomique (axée sur les protéines secrétées). Nous établirons ainsi le rôle des deux répresseurs dans la régulation des gènes du complexe chitinolytique. Nous postulons que les mutants, dé-réprimés, produiront un cocktail d’enzymes chitinolytiques même en absence d’inducteur, dans des milieux de culture compatibles avec une utilisation en biotechnologie. Les enzymes du cocktail seront séparées, purifiées et caractérisées au niveau biochimique afin d’établir leur utilité pour la production de CHOS. La composition du cocktail pourra être manipulée ultérieurement par génie génétique: en inactivant certains gènes, par exemple ceux des hexosaminidases ou d'exo-chitinases de type processif, qui résulteraient en une production de monomères ou d’oligosaccharides de poids moléculaire trop faible. Aussi, des protéines exprimées de manière insuffisante pourront être exprimées à partir d'un vecteur de génie génétique de type intégratif, sous le contrôle d'un promoteur constitutif.Streptosporangium roseum donne l'oportunité de produire un ensemble complet d'enzymes chitinolytiques, hydrolysant efficacament de nombreuses formes de chitine et de chitosane. La composition de ce cocktail peut être influencée par manipulation génétique.

L等L的产业低聚糖(CHOS)S和几丁糖等(形成几丁质)最大的几丁糖和几丁糖的应用前景在医学和植物保护等领域。一个研究生物信息学和一个方向L‘放线菌链霉菌玫瑰，不要Leégénome possède nobrux gènes密码子倾倒DES几丁质酶：几丁质酶GH18和GH19；几丁聚糖酶GH8和GH46，酶De外型家族GH3和GH9和Des单加氧酶Des la几丁质(家族A10)。这是S的回文，也是一种绿色链霉菌实验室。可能的模式是区分玫瑰花放线菌S和S相似的放线菌。这是一种纯净的亲缘关系，不同于S的几丁质地。突变体vec un ou dux代表S的血清génénéréS。Ces突变体S的血清转录(Q-PCR)和所有的蛋白。几丁质溶于复杂的几丁质。明智的原则是突变体，Dé-répriméS，生产鸡尾酒和几丁质分解酶以及缺乏诱导者，环境培养兼容在生物技术中的平均应用。鸡尾酒的酵素和鸡尾酒血清Séparées，Purifiées et Caractérisées au niveau biveique afin d‘éablir leur utilitéour la Production de chs。鸡尾酒的成分：不活跃的某些物质，例如己糖氨酸酶和几丁质酶的类型加工，但不能生产出单一的低聚糖。[中英文摘要]Oussi，des Protéines expromées de manière in fulisante Pourrontètre exprimées de parr da parr de génie génétique de type intrestif，sous le le d‘un proproteur构成.玫瑰色链孢子菌L的几丁质分解酶，水解剂有效地降解几丁质和几丁糖。La Composal de ce鸡尾酒Pautre Informencée Par Manipment Génétique。