黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选方法及作用机制的质谱研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
21175128
项目类别：
面上项目
资助金额：
60.0万
负责人：
刘志强
依托单位：
中国科学院长春应用化学研究所
学科分类：
B0403.谱学方法与理论
结题年份：
2015
批准年份：
2011
项目状态：
已结题
起止时间：
2012-01-01 至2015-12-31

项目参与者：
项颗；刘舒；韩天娇；齐瑶；杨冬；王倩倩；徐晨；
关键词：
在线超滤质谱黄嘌呤氧化酶中药药效组分/成分抑制剂

项目摘要

黄嘌呤氧化酶作为痛风药物开发的作用靶点，其抑制剂是治疗痛风和高尿酸血症的理想药物，因此黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选方法及其作用机制的研究具有重要的理论意义和实际应用价值。本项目以黄嘌呤氧化酶为作用靶点，首先建立快速、灵敏、同时评价中药组分/成分黄嘌呤氧化酶抑制活性和抗氧化活性的质谱分析方法以及中药提取物活性成分筛选和结构鉴定的在线超滤质谱联用技术；其次，在中药提取物体外酶活性筛选基础上，以黄嘌呤氧化酶为靶点，利用构建的在线超滤质谱技术，对具有体外酶抑制活性的提取物进行活性成分筛选和结构鉴定研究；最后，通过建立的高尿酸血症及痛风动物模型，对活性较强的药效组分/成分进行整体动物模型验证，通过考察其血、尿液中尿酸浓度的变化规律，从抑制尿酸产生/促进尿酸排泄两个方面，阐释中药治疗痛风和高尿酸血症的作用机制，为现代中药的研究与开发提供创新的研究思路和方法。

结项摘要

本项目选取与痛风相关的作用靶点——黄嘌呤氧化酶为生物靶分子，建立了同时评价化合物的黄嘌呤氧化酶抑制活性和抗氧化活性的质谱检测方法，并将体外酶活性测定与超滤质谱技术相结合，对中药中具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的成分进行了筛选及表征，并对活性较好的单体化合物进行了分离制备和体外酶抑制活性的进一步确认。此外，选取活性较好的二妙丸及其单味药提取物进行了进一步的体内活性验证，从抑制尿酸产生/促进尿酸排泄两个方面，阐释中药治疗痛风和高尿酸血症的作用机制，为现代中药的研究与开发提供创新的研究思路和方法。具体研究内容如下：.首先，通过在酶促反应体系中加入能够和超氧阴离子反应生成稳定化合物的WST-1，建立了检测化合物酶抑制活性及超氧阴离子清除能力的质谱方法，实现了同时评价中药组分/成分酶抑制活性和抗氧化活性的研究目标；其次，以黄酮和生物碱单体化合物为研究对象，将质谱数据和传统光谱数据相结合，对建立起来的质谱检测方法进行了可行性和有效性验证，质谱检测方法与传统光谱方法得到的结果一致，验证了该方法的可行性；最后，利用建立起来的方法对一系列富含黄酮、生物碱和醌类成分的中药提取物进行了黄嘌呤氧化酶抑制活性和超氧阴离子清除能力评价，研究结果为进一步的超滤质谱筛选研究提供了依据。.利用超滤质谱技术（UF-LC/MS）从具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的中药提取物中筛选并鉴定出近百种活性成分（黄嘌呤氧化酶抑制剂），并通过LC-MSn和UV数据对这些活性成分进行了结构鉴定，在此基础上还对活性较好的单体成分进行了分离制备和活性确证，且对这些活性成分的构效关系进行了系统研究，总结出活性成分母核及侧链结构对活性的影响，为开发痛风治疗药物提供了科学依据。.建立了高尿酸血症及痛风动物模型，对活性较强的二妙丸及其单味药进行整体动物模型验证，通过考察其血、尿液中尿酸浓度的变化规律，从抑制尿酸产生/促进尿酸排泄两个方面，阐释其治疗痛风和高尿酸血症的作用机制，为现代中药的研究与开发提供创新的研究思路和方法。