冬凌草甲素和毛萼乙素靶向治疗AML-M2b型白血病作用机制及最佳联合靶向治疗方案的研究

本项目完成了冬凌草甲素靶向治疗伴t(8;21)染色体易位的AML-M2b型白血病的分子机制研究, 证实冬凌草甲素可以直接结合到AML1-ETO蛋白的部分半胱氨酸的巯基上，通过caspase-3的定向剪切，产生较为稳定的ΔAML1-ETO，抑制后者被caspase-3进一步降解。冬凌草甲素诱导产生的ΔAML1-ETO剪切片段可以通过NHR2结构域与AML1-ETO相互作用，解除AML1-ETO对其靶基因的转录抑制，抑制AML1-ETO引起的NIH3T3细胞的增值，克隆形成以及裸鼠成瘤能力，以及AML1-ETO引起的小鼠骨髓细胞的自我更新能力，从而干扰AML1-ETO的功能，发挥类似于肿瘤抑制因子的功能。我们还和江苏恒瑞制药公司合作开发出了满足临床应用要求的冬凌草甲素酯前药静脉制剂，并完成了大动物长期毒性、特殊毒性等安全性评价。在此基础上，进一步启动了冬凌草甲素酯前药治疗M2b型急性髓细胞白血病0期临床试验，评估冬凌草甲素在复发/难治M2b急性髓细胞白血病患者中的安全性，并初步摸索冬凌草甲素在这群患者中的治疗剂量。.本项目在新建立的AML1-ETO融合基因与C-KIT N822K突变共表达的白血病小鼠模型上初步筛选出了毛萼乙素与传统化疗药物高三尖杉酯碱(Homoharringtonine)、新型酪氨酸激酶抑制剂(Nilotinib)联合治疗方案；证实了毛萼乙素可增加该白血病小鼠对化疗药物如HHT的敏感性、毛萼乙素可与HHT及Nilotinib协同延长小鼠的生存期。对毛萼乙素的药代学分析和毒性与安全性早期评估也进行了初步的探索。.另外，本项目还进行了毛萼乙素在免疫性疾病治疗方面的作用机制研究。毛萼乙素可以有效减轻自身免疫性疾病多发性硬化动物模型——小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的发病程度，延迟其起病时间以及降低模型小鼠的发病率。进一步的深入研究揭示了毛萼乙素的作用机理为：通过阻断EAE发病小鼠体内JAK/STAT信号通路来抑制CD4+ naïve T细胞向致病性Th1和Th17分化；并于起病初期即通过上调ROS水平直接抑制Th17细胞分化以及Th1细胞存活，从而早期干预EAE小鼠免疫反应。此外，毛萼乙素通过影响NF-κB信号通路抑制CD11b+APC细胞的炎性细胞因子的分泌，进一步缓解炎症。