银屑病皮损上皮/内皮-间充质转化及间充质-上皮/内皮转化的研究

上皮间质转化是指上皮细胞在形态学上发生向间充质细胞表型的改变。银屑病是一种以表皮过度增殖、血管内皮异常增生和淋巴细胞浸润为特征的慢性炎症性皮肤病。表皮角质形成细胞在增殖和迁移中表型的转变，其抗凋亡、迁移能力的提升，类似于发生上皮-间充质转化的过程。为了证实银屑病角质形成细胞是否发生EMT，我们在蛋白和mRNA水平对上皮间质分子标志物及其调控因素进行分析。首先利用免疫组织化学、RNAseq以及qRT-PCR等方法，对正常皮肤和银屑病皮肤样本上皮间质分子标志物的表达进行对比研究：上皮分子标志物 选取E-cadherin (E-cad), keratin 10 (K10), K14 和 K16, 间质分子标志物选取Vimentin (Vim), fibronectin (FN), N-cadherin (N-cad), Snail 和 Slug。结果表明上皮分子标志物的表达在两者间并没有明显变化，而间质分子标志物Vim，FN，PAI-1和slug在银屑病表皮的表达明显升高. 在体外培养的银屑病角质形成细胞中，IL-17A 和 IL-13 在50 ng/ml 浓度时能够强烈抑制K10，Vim和FN的表达。TGF-β1 在 50 ng/ml 浓度时能够刺激N-cad, Vim, FN 和 PAI-1的表达. 地塞米松能够抑制Slug的表达而促进E-cad的表达。为了进一步探究ERK, Rho 和 GSK3信号通路在银屑病角质形成细胞EMT的作用，我们分别选取对应的抑制剂U0126, Y27632 和 SB216763.沉默ERK通路能够引起 E-cad 和 K16的表达上调,但同时显著抑制 K14, FN, Vim, β-catenin, Slug 和α5 integrin的表达. 此外抑制 Rho 和GSK3能够引起 E-cad, β-catenin 和Slug的表达上调。地塞米松在0.2μM的浓度与Y27632共孵育时能明显抑制Y27632所引起的E-cad, β-catenin 和 Slug表达上调，但在其2μM浓度时只影响Y27632对β-catenin的影响。 SB216763介导的E-cad过表达在地塞米松0.2μM和2μM浓度时均被抑制，而对β-catenin 和 Slug的影响则只有在地塞米松2μM浓度时才被抑制。总之，我们的研究支持银屑病属于EMT的2型。