ヒト正常細胞におけるEML4-ALKの生物学的役割の検討

EML4-ALKは肺癌に特異的なドライバー融合遺伝子であり、肺腺癌の3－5％で陽性となることが知られている。ALKを標的とした分子標的薬による治療が著効することが知られており、発癌への強い関与が示唆されている。その一方で、先行研究では正常線維芽細胞に導入してもfull transformationには至らず、不死化線維芽細胞にEML4-ALKを導入しても、マウスゼノグラフトモデルでは腫瘍を形成しなかった。今回、ウイルスベクターを用い、肺胞上皮細胞にEML4-ALKを発現させ、線維芽細胞と肺胞上皮細胞の生物学的差異についての検討と発癌のメカニズムについての検討を行う。また、EML4-ALKには複数のVariantが知られている。variant1, variant3の割合が多いことが知られており、海外の報告では、variant3が予後不良因子であったとの報告がある。しかしながら、その機能的解析は報告が乏しく、不十分である。そこで、正常細胞や、不死化細胞を用いて、そのVariantによる差異、生物学的意義の違いについて評価をおこなう。具体的には、EML4-ALKのvariantをそれぞれウイルスベクターを用い導入し、細胞の増殖速度や、細胞老化、invasion assayの評価を行う。網羅的遺伝子発現解析を行い、variant間でのRNA発現量の差異を検討する。また、複数のALK阻害薬を用い、治療への反応性や、耐性化の機序について評価を行う。それにより、最適な治療アルゴリズム、治癒に向けた新規治療方法についての開発を行う。

EML4-ALKは肺癌に特異的なドライバー融合遺伝子であり、肺腺癌の3－5％で陽性となることが知られている。ALKを標的とした分子標的薬による治療が著効することが知られており、発癌への強い関与が示唆されている。その一方で、先行研究では正常線維芽細胞に導入してもfull transformationには至らず、不死化線維芽細胞にEML4-ALKを導入しても、マウスゼノグラフトモデルでは腫瘍を形成しなかった。今回、ウイルスベクターを用い、肺胞上皮細胞にEML4-ALKを発現させ、線維芽細胞と肺胞上皮細胞の生物学的差異についての検討と発癌のメカニズムについての検討を行う。また、EML4-ALKには複数のVariantが知られている。variant1, variant3の割合が多いことが知られており、海外の報告では、variant3が予後不良因子であったとの報告がある。しかしながら、その機能的解析は報告が乏しく、不十分である。そこで、正常細胞や、不死化細胞を用いて、そのVariantによる差異、生物学的意義の違いについて評価をおこなう。具体的には、EML4-ALKのvariantをそれぞれウイルスベクターを用い導入し、細胞の増殖速度や、細胞老化、invasion assayの評価を行う。網羅的遺伝子発現解析を行い、variant間でのRNA発現量の差異を検討する。また、複数のALK阻害薬を用い、治療への反応性や、耐性化の機序について評価を行う。それにより、最適な治療アルゴリズム、治癒に向けた新規治療方法についての開発を行う。