Funktionsanalyse von Keratin-Interaktionen mittels RNAi und homologer Rekombination in humanen Keratinozyten

Die Etablierung von“knockout”-Mäusen mit Hilfe von“gene targeting”（homologe Rekombination）in embryonalen Stammzellen der Maus ist zum wichtigsten Hilfsmittel für die Funktionsanalyze von Genen geworden. Kosten和Mäuse转基因动物的时代已经成为多重突变特征的巨大障碍，就像它们在早期发现Erbkrankheiten一样。在新的时代，“基因靶向”-Verfahren entwickelt沃登，mit deren Hilfe auch Gene in somatischen Zellen gezielt modifiziert韦尔登können. In vorliegenden Antrag sollen durch homolog Rekombination in humanen Keratinocyten gezielte Mutationen in epidermale Keratin-Gene eingeführt韦尔登，如他们在erblichen humanen Hauterkrankungen，z.B.单纯性大疱性表皮病（EBS）是一种沃登性疾病。Ausculturekung的突变与角化细胞的整合性和差异性有关，这是一种器官分型的培养方法，也是一种明确的韦尔登特征的机制。绿色荧光蛋白（GFP）是通过角蛋白5-Gen整合韦尔登的同源重组而形成的一种转基因模型，在基底表皮中起作用。在细胞培养和移植后，体内检测角蛋白启动子的表达。本文首先介绍了角朊细胞中基因靶向治疗的建立，以及在一个复杂的Zellkultursystem中对蛋白质表达和相互作用的辅助突变。

Die Etablierung von "knockout"-Mäusen mit Hilfe von "gene targeting" (homologe Rekombination) in embryonalen Stammzellen der Maus ist zum wichtigsten Hilfsmittel für die Funktionsanalyse von Genen geworden. Die hohen Kosten und die langen Zeiträume für die Herstellung transgener Mäuse sind ein großes Hindernis bei der Charakterisierung multipler Mutationen, wie sie bei zahlreichen menschlichen Erbkrankheiten vorkommen. In jüngster Zeit sind "gene targeting"-Verfahren entwickelt worden, mit deren Hilfe auch Gene in somatischen Zellen gezielt modifiziert werden können.Im vorliegenden Antrag sollen durch homologe Rekombination in humanen Keratinocyten gezielte Mutationen in epidermale Keratin-Gene eingeführt werden, wie sie in erblichen humanen Hauterkrankungen, z.B. Epidermolysis bullosa simplex (EBS) beschrieben worden sind. Die Auswirkung dieser Mutationen auf die Integrität und Differenzierungsleistung von Keratinocyten soll unter organotypischen Kulturbedingungen und unter definiertem mechanischen Streß charakterisiert werden. Außerdem soll das grün fluoreszierende Protein (GFP) als Modell für ein Transgen durch homologe Rekombination in das Keratin 5-Gen integriert werden, das in der basalen Epidermis aktiv ist. Damit soll die Eignung von Keratin-Promotoren für eine langzeitige Genexpression in Zellkultur und, nach Transplantation, in vivo untersucht werden. Langfristig ermöglicht die Etablierung von gene targeting-Verfahren in Keratinocyten die Möglichkeit, die Auswirkung mehrerer Mutationen auf die Expression und Interaktion von Proteinen in einem komplexen Zellkultursystem zu analysieren.